高效液相色譜法快速測定腐乳中誘惑紅的方法研究

鮑俊竹1，俞何鋒2，彭 祺2

（1.品測（上海）檢測科技有限公司，上海 201108；2.紹興文理學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，浙江紹興 312000）

摘 要：目的：建立快速檢測腐乳中誘惑紅色素的高效液相色譜法。方法：樣品溶解調至酸性，聚酰胺富集后進(jìn)行梯度洗脫，用外標法定量檢測。結果：誘惑紅的方法線(xiàn)性在1.0～50.0 µg/mL濃度范圍內，線(xiàn)性相關(guān)系數為0.999 9，樣品的加標回收率為92.00%～103.25%，相對標準偏差為0.89%～1.53%，檢出限（S/N=3）為10.0 µg/kg。結論：本方法具有操作簡(jiǎn)單、分析時(shí)間較短、線(xiàn)性范圍寬和檢出限低的特點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；誘惑紅；腐乳

食用天然色素是從動(dòng)植物組織中提取出來(lái)的，一般對人體無(wú)害。食用合成色素屬于食用人工合成色素。誘惑紅等人工合成色素的著(zhù)色力強，價(jià)格低廉，對于商家來(lái)說(shuō)能很好地提高食品的外觀(guān)性質(zhì)，因此被廣泛使用。但人工合成色素及其代謝物均具有毒性和致癌性，因此使用誘惑紅等人工合成色素一定要控制其使用量，避免過(guò)量使用對人體造成危害[1-3]。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 試劑

誘惑紅標準物質(zhì)；甲醇（色譜純）；0.02 mol/L乙酸銨溶液（pH=4）；聚酰胺粉（200目）；20%檸檬酸；去離子水；甲酸-甲醇溶液；乙醇-氨水溶液。

1.1.2 儀器

美國戴安P680高效液相色譜儀；電子天平；PDA-100二極管陣列檢測器（檢測波長(cháng)190～900 nm）；變色龍色譜工作站；恒溫水浴鍋；燒杯。

1.2 實(shí)驗方法

1.2.1 標準溶液的制備

準確稱(chēng)取0.100 g誘惑紅置50 mL的燒杯中，加水溶解，并把溶液于100 mL容量瓶中定容，得含量1 mg/mL標準儲備液。從中吸取適量配成1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL和50.0 μg/mL的系列標準溶液。

1.2.2 樣品前處理

稱(chēng)取10.0 g腐乳樣品，加30 mL水，于恒溫水浴鍋中溫熱溶解。用20%檸檬酸溶液調至酸性（pH=4），取0.5～1.0 g

聚酰胺粉（200目）攪拌片刻，置于60 ℃水浴中加熱，使色素完全吸附。將溶液中的聚酰胺粉通過(guò)漏斗過(guò)濾，剩下溶液用酸性熱水洗滌去糖。經(jīng)甲酸-甲醇溶液洗滌至洗液無(wú)色，70 ℃的水多次洗滌至洗液中性，乙醇-氨水液分次解吸色素，收集解吸液于水浴鍋中蒸發(fā)濃縮后定容至2 mL，轉入25 mL比色管中，去離子水定容至刻度，經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾后上機待測[4-5]。

1.2.3 定量測定

用標準物質(zhì)的保留時(shí)間定性，采用外標法定量。以質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標，以色譜峰面積為縱坐標繪制標準曲線(xiàn)。根據試樣峰面積，從標準曲線(xiàn)上查出試樣中組分的實(shí)際濃度。

1.2.4 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODSC18（5 μm,4.6 mm×200 mm），不銹鋼柱；流動(dòng)相：甲醇、0.02 mol/L乙酸銨溶液（pH=4）；梯度洗脫：甲醇10%～15%，3 min；15%～98%，9 min；

98%，6 min；流速：1 mL/min；檢測波長(cháng)：510 nm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2 結果與分析

2.1 檢測波長(cháng)的選擇

色譜條件下，在190～900 nm波長(cháng)處掃描，得誘惑紅的紫外吸收波譜見(jiàn)圖1。圖1表明誘惑紅在可見(jiàn)光范圍內在506 nm波長(cháng)下有最大吸收。

圖1 誘惑紅的紫外吸收波譜

 2.2 樣品前處理條件的選擇

（1）提取液的選擇。本實(shí)驗提取誘惑紅的方法分別試用了去離子水、氨水溶液與乙醇氨水溶液。實(shí)驗表明各提取液屬乙醇氨水溶液提取誘惑紅色素的效果最好。

（2）提取液濃縮溫度的選擇。氨水的沸點(diǎn)是78 ℃，在這個(gè)溫度下氨水容易揮發(fā)，因此提取液的溫度選擇在80 ℃。

（3）提取液濃縮體積的選擇。樣品中的目標組分經(jīng)提取后，提取液濃縮體積定在2 mL左右后定容所溶解的色素較完全而且回收率較好，因此選擇2 mL。

2.3 線(xiàn)性關(guān)系和檢出限

根據選擇好的色譜條件下，誘惑紅標準物質(zhì)（5～50 μg/mL）

線(xiàn)性范圍內以1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL和50.0 μg/mL的系列標準溶液進(jìn)樣分析，以誘惑紅峰面積Y（mAU•min）為縱坐標、進(jìn)樣濃度X（μg/mL）為

橫坐標作圖，計算出線(xiàn)性回歸方程為：Y=506.8X+0.099 7，

r=0.999 9，表明誘惑紅濃度與峰面積具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。以S/N=3計得到方法的最低檢測限為10 μg/kg。

2.4 樣品的加標回收

配制不同濃度誘惑紅標準溶液（2.0 µg/mL、4.0 µg/mL和6.0 µg/mL）；腐乳樣品溶濃度分別為5.24 µg/mL和10.20 µg/mL。加標回收以1.2.4方法處理進(jìn)樣，據此計算回收率。由表1可知，不同濃度的樣品添加不同濃度的誘惑紅標準溶液，誘惑紅的回收率為92.00%～103.25%，其相對標準偏差為0.89%～1.53%，本方法是準確可靠的。

 

2.5 精密度

樣品重復測定6次，測得誘惑紅峰面積的RSD為1.06%，表明本方法的精密度良好。

2.6 抗干擾實(shí)驗

胭脂紅與誘惑紅的理化性質(zhì)相同，因此選擇胭脂紅為代表進(jìn)行抗干擾實(shí)驗。對腐乳樣品處理后，利用同樣的色譜條件，分別對胭脂紅和誘惑紅進(jìn)行分離檢測。結果表明對各自的檢出無(wú)影響，見(jiàn)圖2。

3 結論

本文運用高效液相色譜技術(shù)對腐乳中誘惑紅進(jìn)行了快速測定。優(yōu)化樣品前處理條件，有效提取樣品誘惑紅。依據誘惑紅的特性選擇了乙醇氨水溶液作為提取液，效率高且可以直接上機，快速方便。對誘惑紅標準溶液進(jìn)行了全掃描光譜分析，并確定檢測最適合波長(cháng)為506 nm。本文方法的檢出限10.0 mg/kg，回收率在92.00%～103.25%，RSD值均＜5%。本方法測定誘惑紅，其線(xiàn)性、精密度和回收率等指標良好，可作為檢測食品中誘惑紅的推廣

方法。

 

圖2 胭脂紅、誘惑紅的色譜圖

參考文獻

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