氰化物中毒犬只樣品采樣要點(diǎn)

徐玲萍，程文聰，張芳芳

（臺州市食品檢驗檢測中心，浙江臺州 318000）

摘 要：采取氰化物中毒犬只各個(gè)部位的樣本，采用異煙酸比色法測定組織中氰化物的含量。通過(guò)檢測發(fā)現，每一個(gè)部位的氰化物含量都不相同，胃中含量最高，其次是肝臟，肉組織中含量比較低。樣本的存儲溫度和時(shí)間對檢測值也有一定影響，冷凍冷藏保存的樣品測定數值比較穩定，氰化物在20 d內降解較慢，常溫保存樣品測定值與新鮮樣品測定值有明顯差異。因此針對使用氰化物等非法毒物捕殺的犬只應采集胃部，樣本應存儲于冷藏冷凍環(huán)境中，并盡快送檢，才能保證出具的數據最有效可靠。

關(guān)鍵詞：狗肉；氰化物；采樣部位；存儲方式

 

一些地區有吃狗肉的習俗，隨著(zhù)越來(lái)越多的狗肉被消費，市場(chǎng)上也有一些非法的狗肉來(lái)源，如用毒物撲殺的犬只。氰化物是一種速殺型毒物，氫氰酸口服致死量為0.06 g，氰酸鹽為0.1～0.3 g。氰化物進(jìn)入人體內能迅速與細胞色素氧化酶中的3價(jià)鐵結合，組織細胞無(wú)法利用血液中的氧而造成內窒息。中樞神經(jīng)系統對缺氧尤為敏感，氰化物中毒的犬表現為不同程度的中樞性呼吸衰竭癥狀。犬只吸入高濃度的氰化氫氣體或吞服大量氰化物，可在數s至5 min內停止呼吸，呈“電擊樣”死亡[1]。由于其快速高效，氰化物常常被用作撲殺犬只的主要毒物。氰化物在動(dòng)物、人體內不易被分解，人食用被氰化物毒害的狗肉后，輕則出現頭痛、頭昏、惡心嘔吐、食欲不振等中毒癥狀，嚴重的會(huì )因全身功能衰竭而死亡[2]。因而在對犬只的氰化物檢驗中應該執行最為嚴謹的檢測規定。然而樣本的有效性是所有檢驗工作的前提和基礎。制定取樣計劃時(shí)，必須考慮檢測的目的、樣本的性質(zhì)、檢測方法的特點(diǎn)等。取樣程序應該準確規范，選用適宜的取樣工具，熟練掌握取樣操作技術(shù)，有效防止交叉污染。樣本的運輸和保存應該考慮周全，避免檢測目標物的損失或失效，做好正確的標識和記錄[3]。

1 材料與方法

1.1 儀器與設備

分光光度計（UV2600島津）；電子天平（奧豪斯，SA223S-CW）；移液槍?zhuān)‥ppendorf，1～5 mL），冰箱。

1.2 材料與試劑

（1）異煙酸-吡唑啉酮。稱(chēng)取1.5 g異煙酸溶于24 mL氫氧化鈉（20 g/L）溶液中，加水定容至100 mL，另取0.25 g吡唑啉酮，溶于20 mL無(wú)水乙醇中，合并上述兩種溶液，搖勻。

（2）氯胺T。稱(chēng)取1 g氯胺酮溶于水中，稀釋至100 mL。

（3）磷酸鹽緩沖溶液。稱(chēng)取34.0 g無(wú)水磷酸二氫鉀和35.5 g無(wú)水磷酸氫二鈉，溶于水并稀釋至1 000 mL[4]。

乙酸、氫氧化鈉、乙酸鋅、酒石酸均為分析純。

1.3 樣品的制備

犬1、犬2、犬3、犬4、犬5和犬6共6條氰化物中毒犬只為本次實(shí)驗對象。解剖犬只，取每一只犬的舌頭、胃、犬大腿肌肉、肝臟等5個(gè)部位的組織，依次分別勻漿，共形成30個(gè)樣品，馬上測定其氰化物的含量，并留取中毒犬只胃及其內容物樣品待用。

稱(chēng)取上述6條中毒犬只的胃及其內容物樣品，每份５ g，分裝至試管內，密封，保存到4 ℃冰箱內，共6份樣品，于1 d、3 d、8 d、15 d、20 d和30 d后，分別測定其氰化物的含量。

稱(chēng)取上述6條中毒犬只的胃及其內容物樣品，每只中毒犬取兩份，每份5 g，依次裝到試管內并密封，再依次保存到-20 ℃、25 ℃的壞境中，共形成12份樣品，于20 d后分別測定其氰化物的含量。

1.4 試驗方法

1.4.1　標準溶液的配制

吸取0 mL、0.3 mL、0.6 mL、0.9 mL、1.2 mL、1.5 mL和2.0 mL的1 mg/L氰標準溶液于25 mL比色管中，加水定容至10 mL。

1.4.2　樣品前處理

稱(chēng)取樣品5 g于500 mL蒸餾瓶中，加蒸餾水浸沒(méi)樣品，加100 g/L乙酸鋅溶液20 mL，加入酒石酸2 g，迅速連接好蒸餾裝置，加熱蒸餾。將冷凝管下端插入10 g/L氫氧化鈉10 mL中，收集蒸餾液并用純水定容至50 mL，移取10 mL蒸餾液于25 mL比色管中。

試樣溶液及標準溶液各加酚酞1滴，用乙酸（1+20）調至紅消失，再用2 g/L氫氧化鈉溶液調至近紅色，然后加5 mL磷酸鹽緩沖溶液，37 ℃水浴10 min，再加入0.25 mL氯胺T溶液，搖勻放置5 min，加入5 mL異煙酸-吡唑啉酮溶液，加水稀釋至刻度，加塞振蕩混合均勻，在37 ℃恒溫水浴鍋中放置40 min，取出用1 cm比色杯以零管調節零點(diǎn)，于波長(cháng)638 nm處測吸光度[5-6]。

2 結果與分析

2.1 采樣部位和測定值的關(guān)系

分析測定結果發(fā)現，肉中氰化物檢出量最低，舌頭氰化物檢出量是肉中的1.9倍，肝臟氰化物檢出量是肉中的10.8倍，胃中氰化物檢出量是肉中的46.8倍，胃中氰化物檢出量最高，具體如表1和圖1所示。

氰化物在犬只各組織中的分布情況和氰化物的中毒機理有明顯的關(guān)系。氰化物中毒非?？焖?，且致死量很低。毒物進(jìn)入犬只體內后，還沒(méi)有被完全消化和吸收，即可引起犬只中毒死亡，所以在胃部殘留了大量的氰化物。肝臟雖然是解毒器官，但慢性中毒時(shí)，毒物蓄積會(huì )比較明顯。氰化物在肝臟中殘留量的影響因素比較復雜，不同的犬只其相對含量差異較大，但是均比肉中含量高。所以針對氰化物等在食品生產(chǎn)銷(xiāo)售中非法使用的物質(zhì)的檢測，若采集肌肉等器官送往檢測機構檢測，結果往往是未檢出。市場(chǎng)監督管理部門(mén)無(wú)法準確辨別犬只是否為氰化物所毒殺，不法分子將有機可乘。這也是市場(chǎng)上氰化物毒殺犬只屢禁不絕的一個(gè)重要原因，給消費者帶來(lái)了巨大的威脅[7-8]。

 

2.2 存儲溫度和測定值的關(guān)系

冷凍保存和冷藏保存的樣品測定值與樣品的采集當天的數據沒(méi)有明顯的差異，而常溫保存的樣品其測定值明顯偏底，僅為采樣當天的6%～35%，見(jiàn)表2和圖2。

本試驗證明樣品應該保存在冷藏和冷凍的環(huán)境中，氰化物在冷藏或冷凍的環(huán)境中20 d內能保證較為穩定的含量值，如長(cháng)時(shí)間放置在常溫的環(huán)境中，測定的數據將會(huì )偏低，不能真實(shí)反應送檢的樣品的實(shí)際含量。在常溫的環(huán)境中，樣品有明顯的腐臭味，顏色變黑，胃及內容物的混合物中氰化物以氫氰酸、氰化鉀、有機氰化物等形式存在，微生物能降解一部分氰化物，氫氰酸在高溫環(huán)境中也從樣品中溢出，導致測定結果明顯偏低，對于含量本來(lái)不高的樣品，可能無(wú)法檢測出來(lái)，樣品也失去了其代表性。樣品由采樣人員采集后，如何進(jìn)行有效的保存和運輸，也就是確保分析目標物不損失和降解，是由樣本的本質(zhì)和分析方法決定的。如對儲存的溫度、空氣、光照等條件的有效控制。針對氰化物樣品的環(huán)境條件的要求，采樣單位應配備冷鏈設施。

2.3 檢測時(shí)間和測定值的關(guān)系

在冷藏（4 ℃）條件下，不同放置時(shí)間的毒犬只胃中氰化物的測定結果顯示，相對偏差為5.5%～11.8%，數據的差異性不明顯。由圖3也清楚顯示冷藏的環(huán)境中樣品中氰化物并沒(méi)有隨著(zhù)時(shí)間的變化發(fā)生明顯的下降趨勢，比較穩定。檢測過(guò)程中樣品穩定性給檢測結果的可靠性帶來(lái)了有利的因素，另外，氰化物在低溫的環(huán)境中降解速度較慢，使食用該樣品的危險因素長(cháng)期存在[9]。

樣品從采集完成到送檢檢測機構，其中有運輸和存儲的時(shí)間，檢測機構從受理樣品到開(kāi)始檢測也存在時(shí)間差。合理安排和控制檢測時(shí)間，是影響樣品測定結果的重要因素，也是確保數據有良好復現性的重要前提。試驗結果表明在冷藏條件下氰化物測定從采樣到檢測時(shí)間控制在20 d內，測定結果差異不顯著(zhù)。

 

3 結論

樣品具有代表性、真實(shí)性是食品檢驗中對樣品的基本要求，這是保證檢驗結果準確可靠的重要前提。很多檢驗工作者在其論文中闡述了樣品管理在檢驗檢測工作中的重要性，及如何取保樣品有效性的方法?？茖W(xué)規范地采集氰化物中毒犬只樣本尤為重要。在對氰化物中毒的犬只取樣過(guò)程中，應注意氰化物在全身的分布情況，選取有代表性的部位進(jìn)行送檢，胃部、肝臟中含量較多，肌肉和口腔等殘留較少。

樣品在采集后保存條件的控制也是檢驗流程的重要組成部分。本試驗設置了冷凍、冷藏和常溫3個(gè)不同的存儲條件，對其結果差異性進(jìn)行了分析研究，發(fā)現冷藏和冷凍保存的樣品數據穩定，常溫下保存樣品氰化物含量有明顯的降解。本試驗中，在對所有樣本冷藏保存20 d內含量變化趨勢監測中沒(méi)有發(fā)現明顯波動(dòng)，可見(jiàn)此穩定下氰化物降解較為平穩緩慢，降解率在12%之內。所以氰化物中毒的犬只樣本應該保存在冷藏或冷凍的條件下，并在20 d內完成實(shí)驗室檢測，有助于確保檢測結果的準確可靠[10-11]。

參考文獻

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