原標題：基質(zhì)分散固相萃取-超高效液相色譜法檢測辣椒制品中蘇丹紅染料
　　□ 曾憲冬 柳潔 曾灼祥 孟楠 深圳市南山區疾病預防控制中心

　　摘 要：本文結合基質(zhì)分散固相萃取和超高效液相色譜技術(shù)，建立一種快速、簡(jiǎn)單的測定辣椒制品蘇丹紅類(lèi)染料殘留的分析方法。該方法簡(jiǎn)單、快速、準確，適用于辣椒制品中蘇丹紅類(lèi)染料的測定。4種蘇丹紅在0.05～2.0μg/mL的范圍內，濃度與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，檢出限為0.01mg/kg，加標回收率在83.7%～101.2%之間，相對標準偏差在1.16%～7.58%之間。

　　關(guān)鍵詞：基質(zhì)分散固相萃取 超高效液相色譜 蘇丹紅染料 辣椒制品

　　蘇丹紅是一類(lèi)廣泛應用于油彩、蠟、地板蠟、和香皂等工業(yè)中的人工合成化工染色劑，長(cháng)期攝入會(huì )在體內累積而造成肌體損傷或基因突變而致癌[1]。中國和歐盟均已禁止其用于食品生產(chǎn)中，但仍有不法廠(chǎng)商在辣椒等食品中非法添加使用。由于辣椒制品基質(zhì)復雜，需要對樣品進(jìn)行萃取凈化，常用的前處理方法有固相萃取法、液-液萃取法、分子印跡固相萃取法等，然而這些預處理方法存在耗時(shí)、有機溶劑用量大和操作繁瑣等問(wèn)題?，F行國標方法中，前處理步驟繁瑣，且難以準確控制氧化鋁的活化程度造成方法重現性較差[2]?；|(zhì)分散固相萃取是近年發(fā)展起來(lái)的一種新型樣品預處理技術(shù)，目前在食品安全監測中已有較多應用[3]。本研究利用MSPD進(jìn)行樣品預處理，結合超高效液相色譜法檢測，建立了一種簡(jiǎn)單、快速、準確檢測辣椒制品中4種蘇丹紅的方法。

　　1 實(shí)驗部分

　　1.1 儀器和試劑

　　Waters ACQUITY UPLC H-CLASS超高效液相色譜儀。

　　蘇丹紅I、II、III、IV標準品(含量均>95%，德國Dr.Enrenstorfer公司);甲醇、乙腈、正己烷和丙酮(HPLC級，美國Fisher公司);弗羅里硅土(60-100目，阿拉丁試劑);中性氧化鋁(100-200目，阿拉丁試劑);其余試劑均為分析純，試驗用水超純水。

　　1.2 色譜條件

　　色譜柱：BEH C18柱，2.1×50mm,1.7μm;柱溫：30℃;進(jìn)樣量：2μL;檢測波長(cháng)：蘇丹紅I：475nm，蘇丹紅II、III、IV：520nm;流動(dòng)相：乙腈—0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫。

　　1.3 測定方法

　　1.3.1 標準溶液的配制

　　準確稱(chēng)取蘇丹紅I、II、III、IV各10.0mg于100mL容量瓶中，加乙腈溶解后定容至刻度，配成100mg/mL的儲備液。臨用前用乙腈配成0，0.02，0.05，0.1，0.5，1.2μg/mL的標準系列。

　　1.3.2 樣品前處理

　　準確稱(chēng)取0.50g樣品于玻璃研缽中，加入0.50g無(wú)水硫酸鈉、0.50g弗羅里硅土(或其他吸附劑)、0.50g石英砂。將上述樣品在研缽中研磨3～5min，直至獲得均勻干燥的混合物。將研磨好的樣品裝于6ml的空固相萃取柱中，用玻璃棒輕輕按壓平整。填裝好的樣品，先加入5mL正己烷除掉脂肪等雜質(zhì)，然后加入5mL乙腈進(jìn)行洗脫，棄去最初的1mL洗脫液后進(jìn)行收集，收集的洗脫液在70℃下用氮吹至干，加入0.5mL乙腈溶解后作為樣品分析液。

　　1.3.3 樣品測定

　　取標準系列應用溶液和樣品分析液各2.0μL上超高效液相色譜儀分析，以保留時(shí)間定性，峰面積外標法定量。

　　2 結果與討論

　　2.1 基質(zhì)分散固相萃取條件的優(yōu)化

　　2.1.1 吸附劑種類(lèi)及用量的選擇

　　比較了C18、PSA陰離子交換吸附劑、WCX弱陽(yáng)離子交換吸附劑、中性氧化鋁及弗羅里硅土5種不同類(lèi)型吸附劑萃取效果。結果表明使用弗羅里硅土，可以獲得較滿(mǎn)意的回收率，其原因在于弗羅里硅土對四種蘇丹紅染料具有較強的吸附作用，確保在凈化過(guò)程不被正己烷洗脫，同時(shí)能很好地被乙腈洗脫下來(lái)進(jìn)行測定。因此，選用弗羅里硅土作為吸附劑。

　　吸附劑用量對吸附效果具有重要影響，對于0.5g加標濃度為0.5mg/kg的辣椒醬樣品，當吸附劑用量從0.1g增加至0.5g時(shí)，回收率也隨之增大，當吸附劑用量大于0.5g后，回收率趨于穩定，因此本研究中吸附劑的用量選取為0.5g，即樣品量與吸附劑量為1∶1。

　　2.1.2 凈化與洗脫溶劑的選擇

　　辣椒制品中含有大量的油脂類(lèi)物質(zhì)，不但影響蘇丹紅在液相色譜儀上的測定，還會(huì )影響到樣品提取液的濃縮，因此在洗脫之前要對樣品進(jìn)行凈化，通過(guò)實(shí)驗表明，使用5mL正己烷沖洗基質(zhì)分散固相萃取柱，可以很好地去除脂肪及弱極性的干擾物。

　　本研究試驗了丙酮、乙腈、乙腈-水(8∶2)、甲醇5種溶劑的洗脫效果，結果表明，5種溶劑均能有效地洗脫蘇丹紅染料，但是用丙酮作為洗脫劑的情況下，樣品中的一些極性物質(zhì)被丙酮洗脫下來(lái)，不能和蘇丹紅I的峰很好地分開(kāi)，干擾其測定?？紤]到液相色譜所使用的流動(dòng)相，本研究選擇乙腈作為洗脫溶劑。

　　2.2 色譜條件的選擇

　　2.2.1 色譜柱及流動(dòng)相的選擇

　　蘇丹紅類(lèi)染料具有親脂性，在反相色譜柱上具有較強的保留時(shí)間，本研究選擇BEH C18 2.1×50mm,1.7μm的柱子作為分離柱，4種蘇丹紅染料能得到很好地分離。

　　蘇丹紅類(lèi)染料的分子結構中含有的偶氮基易與鄰位的羥基形成分子內氫鍵，具有較好的穩定性、不易解離。在流動(dòng)相中加入一定量的甲酸，將有利于蘇丹紅分子內氫鍵的形成。通過(guò)實(shí)驗，最終確定以乙腈和0.1%的甲酸水溶液作為流動(dòng)相，梯度洗脫下，4種蘇丹紅峰形良好，都能與樣品中的雜質(zhì)得到較好地分離。

　　2.2.2 檢測波長(cháng)的選擇

　　通過(guò)對蘇丹紅(Ⅰ、II、III、IV)標準溶液進(jìn)行光譜掃描，確定檢測波長(cháng)為蘇丹紅Ⅰ478nm，蘇丹紅II、III、IV520nm。

　　在選定的色譜條件下，加標濃度為0.2mg/kg的辣椒油樣品色譜圖如圖1所示，從圖中可以看出4種蘇丹紅在3分鐘內能得到很好地分離，樣品基質(zhì)對于測定沒(méi)有干擾，在4種蘇丹紅全部出峰后繼續運行1分鐘，使得樣品提取液中的類(lèi)胡蘿卜素完全流出，總的色譜分析時(shí)間僅需4分鐘。

　　2.3 方法的線(xiàn)性范圍與檢出限

　　以蘇丹紅濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線(xiàn)，結果表明4種蘇丹紅濃度在0.05～2.0μg/mL的范圍內與峰面積呈良好線(xiàn)性關(guān)系(圖2)，以3倍信噪比計算，上機液中蘇丹紅的最低檢出濃度均為0.01μg/mL。以取樣量0.5g，提取液濃縮至0.5mL計，樣品中蘇丹紅的檢出限為0.01mg/kg。

　　2.4 回收率與精密度

　　以不含蘇丹紅的辣椒、辣椒醬、火鍋底料為空白樣品基質(zhì)，進(jìn)行低、中、高3個(gè)不同濃度(0.05、0.1、0.5 mg/kg)的加標回收實(shí)驗，每一濃度水平測定6次。4種蘇丹紅染料的回收率為83.7%～101.2%，相對標準偏差為1.16%～7.58%，這些結果表明該方法具有良好的準確度與精密度。

　　3 結論

　　針對辣椒制品的復雜基質(zhì)，本文探討了基質(zhì)分散固相萃取凈化技術(shù)結合超高效液相色譜法快速檢測辣椒制品的蘇丹紅I、II、III、IV含量，方法前處理簡(jiǎn)單方便，分析速度快，靈敏度高、具有良好的線(xiàn)性范圍及低的檢出限。為辣椒制品中違法添加蘇丹紅著(zhù)色劑的分析提供了一種方便、快速、準確的方法。

　　參考文獻

　　[1] 劉芳，秦秀榮.蘇丹紅及其加入食品中的危害[J].時(shí)代教育(教育教學(xué)版)，2008，(3)：226-227.

　　[2] 中華人民共和國質(zhì)量監督檢驗檢疫總局.GB/T 19861-2005.食品中蘇丹紅染料的檢測方法高效液相色譜法[S].北京：中國標準出版社，2005.

　　[3] 渠凌麗，周穎，權泰鵬等.基質(zhì)分散固相萃取-高效液相色譜法快速測定奶粉中三聚氰胺[J].中國衛生檢驗雜志，2012，21(11)：2595-2597.