乙酸酐和三乙胺組合衍生在水產(chǎn)品中氯霉素測定的應用

2017-10-24 11:23:48 來(lái)源： 食品安全導刊

　　氯霉素廣泛應用于動(dòng)物傳染性疾病的治療，曾在水產(chǎn)養殖業(yè)中得到廣泛的應用，但同時(shí)也帶來(lái)了嚴重的殘留問(wèn)題，氯霉素能夠抑制人體骨髓造血功能，引起貧血等。因此對水產(chǎn)品中的氯霉素的檢測具有特殊意義。
 
　　國內外文獻報道氯霉素類(lèi)藥物的檢測方法主要采用氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法靈敏度高，但價(jià)格昂貴，一般基層實(shí)驗室不配備這樣的儀器，因此不適合于基層實(shí)驗室大量檢測市場(chǎng)上水產(chǎn)品中氯霉素的含量。氣相色譜儀價(jià)格便宜，適合于我們日常生活中水產(chǎn)品中氯霉素的檢測。國內外檢測氯霉素的常用方法大多數與國家標準SC/T 3018-2004方法類(lèi)似，利用N,O-雙（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）/三甲基氯硅烷（TMSCl）作為衍生劑,吡啶作為催化劑。但BSTFA對環(huán)境的濕度很敏感，需要嚴格控制反應條件，并且衍生后的氮-硅鍵和氧-硅鍵在氣相色譜的加熱環(huán)境下有可能分解，影響測定和實(shí)驗重現性。吡啶是一個(gè)具有惡臭的有毒氣體，應用吡啶作為催化劑具有二次污染和對實(shí)驗人員造成危害。
 
　　針對現有技術(shù)的不足，我們研發(fā)了一種新的氯霉素測定方法。
 
　　實(shí)驗部分材料、試劑、儀器：檢測的樣品為魚(yú)、蝦和蟹。甲醇、正己烷、乙腈；乙酸乙酯。氣相色譜儀；旋轉蒸發(fā)儀；電子天平；旋渦混合器；毛細管氣相色譜柱RTX-5ms。氯霉素標準品來(lái)自于德國Dr.Ehrenstorfer標準品公司，純度≥99%。
 
　　方法氣相色譜的條件為：采用RTX-5ms作為固定相的毛細管柱，所述毛細管柱的柱長(cháng)為30m、內徑為0.25mm、膜厚度為0.25μm；柱溫為程序升溫，初始溫度150℃，保持1min，以15℃/min的速率升溫至260℃，保持10min，再以30℃/min的速率升溫至280℃，保持5min；總運行時(shí)間為24min；載氣為氦氣，純度≥99.99%；采用恒流模式，線(xiàn)速度為31.1cm/s；進(jìn)樣口溫度為260℃，不分離進(jìn)樣；檢測器為63Ni電子捕獲檢測器。
 
　　樣品處理樣品預處理：取待測水產(chǎn)品，取肌肉部分，稱(chēng)取5g置于離心管中，加入20mL乙酸乙酯，均質(zhì)機均質(zhì)1min，4000r/min離心3min，得到的混合液轉移到細口雞心瓶中；再向離心管加入10mL乙酸乙酯，均質(zhì)1min,4000r/min離心3min，合并乙酸乙酯提取液，于40℃水浴中減壓旋轉蒸發(fā)近干。
 
　　樣品凈化：向雞心瓶中加入1mL甲醇旋渦混合溶解經(jīng)樣品預處理處理的樣品殘留物，再加入15mL正己烷和25mL4%氯化鈉溶液，振蕩混合1min后轉移到離心管中，4000r/min下離心2min，棄去上層正己烷相；再向水相中加入10mL正己烷，振蕩、離心后棄去正己烷相；向所述水相中加入15mL乙酸乙酯，旋渦混合2min，3000r/min離心3min，吸取乙酸乙酯層，經(jīng)過(guò)無(wú)水硫酸鈉柱脫水過(guò)濾于50mL雞心瓶中；再向水相中加入5mL乙酸乙酯，旋渦混合、離心后吸取乙酸乙酯層，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉柱脫水過(guò)濾；用少量乙酸乙酯淋洗無(wú)水硫酸鈉柱，合并提取液，40℃水浴中減壓旋轉蒸發(fā)近干。
 
　　樣品及標準品的衍生化樣品的衍生化：往旋轉蒸發(fā)近干的提取物中加入2mL乙酸乙酯溶解并轉移到離心管中，再用1-2mL乙酸乙酯洗滌提取物，合并乙酸乙酯，加入300μl乙酸酐和300μl的三乙胺，用乙酸乙酯定容到5mL后旋渦2min，得到樣品溶液，供氣相色譜分析備用；標準品的衍生化：取適量標準品于離心管中，加入300μl乙酸酐和300μl的三乙胺，用乙酸乙酯定容到5mL后旋渦2min，得到標準品溶液，供氣相色譜分析備用。
 
　　氣相色譜檢測分別吸取衍生后的標準品溶液和樣品溶液，注入氣相色譜儀中進(jìn)行測定。
 
　　結果與討論取衍生后的氯霉素標準品溶液進(jìn)行檢測，結果見(jiàn)圖1。從圖1可以看出，標準品的色譜圖峰形尖銳、對稱(chēng)，與鄰近峰完全分離。
 
　　
 
　　催化劑的選擇：本實(shí)驗室嘗試過(guò)采用乙酸酐和吡啶作為組合衍生試劑，效果良好。但吡啶具有惡臭和對人體毒性大，經(jīng)過(guò)考慮，本實(shí)驗室采用價(jià)格更便宜的，極少采用的三乙胺催化劑來(lái)代替吡啶，減少對環(huán)境的污染和對實(shí)驗人員的傷害。
 
　　衍生試劑的選擇：N,O-雙（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺/三甲基氯硅烷是一組經(jīng)常使用的衍生試劑，但其對環(huán)境要求嚴格，衍生試劑昂貴，不能大量使用。改用乙酸酐后，乙酸酐價(jià)格便宜，能夠大量使用，并且對水的穩定性比較好。
 
　　標準曲線(xiàn)、檢出限、回收率與精密度：在20-250μg/L范圍內，氯霉素濃度與峰面積呈現良好的線(xiàn)性關(guān)系,其線(xiàn)性回歸方程為：Y=8665.5X，相關(guān)系數為0.9990，檢出限為3μg/L。取一份經(jīng)檢測不含有氯霉素的樣品作為空白樣品，測得平均加標回收率大于72%，標準偏差為2.6%～5.8%。
 
　　潘金銅浙江海洋大學(xué)
 
　　羅杰鴻廣州京誠檢測技術(shù)有限公司
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