銅綠假單胞菌也稱(chēng)綠膿桿菌，是一種常見(jiàn)的條件致病菌。銅綠假單胞菌在自然界分布廣泛，存在于空氣、土壤、水體、動(dòng)物和人皮膚、呼吸道及腸道中。銅綠假單胞菌能夠產(chǎn)生溶于水的綠膿菌素、熒光色素、紅膿菌素，同時(shí)該菌還能夠產(chǎn)生內毒素、胞外毒素、外毒素A等十余種致病因子，其中外毒素A為重要的致死因子。在食品檢測領(lǐng)域，銅綠假單胞菌是一種非常重要的水源性致病菌，其廣泛存在于水源水及各類(lèi)型包裝飲用水中。近年來(lái)，隨著(zhù)包裝飲用水生產(chǎn)和消費量的不斷上升，銅綠假單胞菌污染包裝飲用水的報道逐漸增多，甚至引起食物中毒?，F階段，包裝飲用水中銅綠假單胞菌污染的問(wèn)題日益受到重視，包裝飲用水中的銅綠假單胞菌已經(jīng)成為各級監管部門(mén)和檢測機構重點(diǎn)監測的對象。包裝飲用水新國標GB19298-2014于2015年5月24號正式實(shí)施，新國標修改了微生物指標與限量，銅綠假單胞菌被列為必檢的微生物檢測項目之一。為了掌握新國標實(shí)施以來(lái)貴州省內生產(chǎn)和銷(xiāo)售的包裝飲用水中銅綠假單胞菌污染的情況，本文共檢測了291個(gè)批次的包裝飲用水，結果分析如下。

　　材料與方法(一)樣品來(lái)源 包裝飲用水新國標GB19298-2014于2015年5月24日開(kāi)始實(shí)施，所以此次檢測和統計的水樣為2015年5月24日至2015年12月31日抽檢的樣品。檢測樣品由專(zhuān)業(yè)抽樣人員在貴州省內各包裝飲用水生產(chǎn)企業(yè)和供水站進(jìn)行隨機抽樣，共抽取了291個(gè)批次的包裝飲用水。各個(gè)批次的包裝飲用水均在有效期內進(jìn)行檢測。(二)試劑與儀器CN瓊脂(貨號：027254)、金氏B培養基(貨號：027052)購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。乙酰胺肉湯(貨號：HB8653)、納氏試劑(貨號：HB8654)、氧化酶試紙(貨號：HB2100)購自青島海博生物技術(shù)有限公司。0.45μm濾膜(貨號：HAWG047S6)和過(guò)濾儀器購自密理博中國有限公司。三用紫外分析儀購自上海漢諾儀器有限公司。(三)檢測方法及評價(jià)嚴格按照國標GB/T8538 4.54-2008進(jìn)行銅綠假單胞菌的檢測。采用濾膜法進(jìn)行銅綠假單胞菌的檢測，將250ml水樣用0.45μm孔徑的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，然后將濾膜移至CN瓊脂平板上，于36℃±1℃恒溫培養箱中培養40-48h。在培養20-24h和40-48h后觀(guān)察濾膜上菌落的生長(cháng)情況：①濾膜上所有顯綠色或藍色的菌落，直接判定為銅綠假單胞菌并計數;②在長(cháng)波紫外燈(365nm)下檢查濾膜，能夠產(chǎn)生熒光的非綠/藍菌落為疑似銅綠假單胞菌，進(jìn)行乙酰胺肉湯產(chǎn)胺試驗，產(chǎn)胺試驗實(shí)驗陽(yáng)性判定為銅綠假單胞菌;③濾膜上不發(fā)熒光的紅褐色菌落進(jìn)行乙酰胺肉湯產(chǎn)胺試驗、氧化酶實(shí)驗、金氏B產(chǎn)熒光實(shí)驗，如上述三項實(shí)驗均為陽(yáng)性，則判定為銅綠假單胞菌[7]。實(shí)驗過(guò)程中使用銅綠假單胞菌陽(yáng)性標準菌株(CMCC:10104)作為對照。檢測結果按照GB19298、DBS52/008等相關(guān)標準進(jìn)行衛生學(xué)評價(jià)。

　　結果(一)不同類(lèi)型包裝飲用水中銅綠假單胞菌檢出情況本次共檢測291個(gè)批次的包裝飲用水，檢出銅綠假單胞菌陽(yáng)性樣品9個(gè)批次，檢出率為3.09%，檢出范圍為2-51 CFU/250ml。天熱飲用山泉水為215個(gè)批次，檢出銅綠假單胞菌陽(yáng)性樣品7個(gè)批次，檢出率為3.24%，檢出范圍為2-51 CFU/250ml。飲用純凈水為75個(gè)批次，檢出銅綠假單胞菌陽(yáng)性樣品2個(gè)批次，檢出率為2.67%，檢出范圍為4-32 CFU/250ml。天然飲用山泉水與飲用純凈水銅綠假單胞菌檢出率無(wú)顯著(zhù)性差異(χ2=0.02，P>0.05)(見(jiàn)表1)。

　　表1 不同類(lèi)型包裝飲用水中銅綠假單胞菌檢出情況

　　樣品

　　批次 銅綠假單胞菌指標 檢出率 檢出范圍

　　合格 不合格 (%) (CFU/250ml)

　　天然飲用

　　山泉水 216 209 7 3.24 2-51

　　飲用純凈水 75 73 2 2.67 4-32

　　合計 291 282 9 3.09 2-51

　　(二)不同包裝類(lèi)型飲用水中銅綠假單胞菌檢出情況

　　瓶裝飲用水共26個(gè)批次，未檢出銅綠假單胞菌陽(yáng)性樣品。桶裝飲用水共265個(gè)批次，檢出銅綠假單胞菌陽(yáng)性樣品9個(gè)批次，檢出率為3.40%，檢出范圍為2-51 CFU/250ml。瓶裝飲用水與桶裝飲用水銅綠假單胞菌檢出率無(wú)顯著(zhù)性差異(χ2=0.91，P>0.05)(見(jiàn)表2)。

　　表2 不同包裝類(lèi)型飲用水中銅綠假單胞菌檢出情況

　　樣品

　　批次 銅綠假單胞菌指標 檢出率 檢出范圍

　　合格 不合格 (%) (CFU/250ml)

　　瓶裝飲用水 26 26 0 0.00 0

　　桶裝飲用水 265 256 9 3.40 2-51

　　合計 291 282 9 3.09 2-51

　　包裝飲用水是密封于符合食品安全標準和相關(guān)規定的包裝容器中,可供直接飲用的水[6]。本文共檢測了291個(gè)批次的包裝飲用水，檢出銅綠假單胞菌陽(yáng)性樣品9個(gè)批次，檢出率為3.09%，說(shuō)明目前貴州省內生產(chǎn)和銷(xiāo)售的包裝飲用水存在銅綠假單胞菌污染問(wèn)題，應引起市場(chǎng)監管、食品藥品監督管理局等相關(guān)部門(mén)的重視。

　　本次檢測中銅綠假單胞菌檢出率為3.09%，低于其他地區的檢出率。王燕梅等的調查報告中顯示在江蘇省7個(gè)省轄市中，銅綠假單胞菌的檢出率為10.3%(34/331)。陳松等的文章中顯示四川達州市銅綠假單胞菌的檢出率為52.17%(12/23)[。魏磊等的抽樣檢測結果顯示山泉水成品水中銅綠假單胞菌的檢出率為5.6%。

　　本次檢測結果顯示貴州省內生產(chǎn)和銷(xiāo)售的包裝飲用水存在銅綠假單胞菌污染問(wèn)題。從以往的研究結果來(lái)看，銅綠假單胞菌污染包裝飲用水的主要原因有：一是生產(chǎn)用水源被銅綠假單胞菌污染，魏磊、鄧梅清等的調查顯示生產(chǎn)用水源水的銅綠假單胞菌檢出率顯著(zhù)高于成品水的檢出率;二是水處理和灌裝過(guò)程中引起的銅綠假單胞菌污染，不科學(xué)的水處理方式、反沖洗操作不當、未徹底消毒的生產(chǎn)環(huán)境和生產(chǎn)設備等都有可能引起銅綠假單胞菌對成品水的污染;三是包裝材料的選擇與清洗消毒不當會(huì )引起銅綠假單胞菌的污染。

　　隨著(zhù)經(jīng)濟與社會(huì )的發(fā)展，包裝飲用水的消費量逐年增長(cháng)，為了保障包裝飲用水的衛生質(zhì)量，降低包裝飲用水銅綠假單胞菌污染風(fēng)險，保護消費者的切身利益，生產(chǎn)企業(yè)應對水源進(jìn)行科學(xué)的保護和管理，選擇科學(xué)的水處理方式，科學(xué)合理地對生產(chǎn)環(huán)境、生產(chǎn)設備、包裝材料進(jìn)行清洗消毒;監管部門(mén)應加強對生產(chǎn)企業(yè)的監督和抽查力度，督促包裝飲用水生產(chǎn)企業(yè)嚴格按照國家標準進(jìn)行生產(chǎn)、運輸和貯存，切實(shí)保障包裝飲用水的質(zhì)量和衛生安全。

　　第一作者及通訊作者：

　　姓名：羅紹楠 男，布依族，碩士研究生，貴州省產(chǎn)品質(zhì)量監督檢驗院工作，助理工程師，研究方向：食品微生物檢測。

　　其他作者：戴奕杰、劉廷菊、肖莉：工作單位：貴州省產(chǎn)品質(zhì)量監督檢驗院。