□ 北京萊伯泰科儀器股份有限公司 供稿

　　本文介紹的方法采用PrepElite-GVS(濃縮系統-GPC凝膠凈化系統-SPE分離系統)全自動(dòng)樣品前處理平臺對牛奶樣品進(jìn)行GPC和C18固相萃取柱凈化，并采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析檢測其中的3種硝基咪唑類(lèi)藥物殘留，3種硝基咪唑類(lèi)藥物殘留的回收率均在60%～85%之間，RSD均小于7%。

　　在樣品前處理過(guò)程中，往往包括很多步驟，并且步步相連。萊伯泰科(LabTech)經(jīng)過(guò)多年在樣品前處理領(lǐng)域的大力開(kāi)拓，大力推出有機分析樣品前處理整體解決方案——全自動(dòng)樣品前處理平臺，平臺由三部分組成(濃縮系統-GPC凝膠凈化系統-SPE分離系統)，這不但能滿(mǎn)足單一步驟的實(shí)驗需求，而且可以實(shí)現多個(gè)產(chǎn)品的在線(xiàn)聯(lián)機，大大簡(jiǎn)化繁瑣的樣品前處理流程，降低實(shí)驗室工作量，提高工作效率，保證結果的平行性和準確性，同時(shí)系統的密閉性及溶劑回收功能，也可保護操作人員免受有毒有害物質(zhì)的危害。平臺廣泛應用于環(huán)境、食品檢測、農產(chǎn)品檢測、生命科學(xué)等領(lǐng)域。

　　硝基咪唑類(lèi)藥物(Nitroimidazoles)是帶有硝基的咪唑化合物，其性狀為白色或淡黃色結晶，弱堿性，能和酸結合成鹽，遇光易分解，易溶于甲醇，微溶于水，主要用于預防和治療家禽的滴蟲(chóng)病、豬的出血性下痢及厭氧菌感染，并具有促生長(cháng)作用，但是該類(lèi)藥物對哺乳動(dòng)物具有致癌、致畸、致突變作用和遺傳毒性。常見(jiàn)硝基咪唑類(lèi)藥物包括甲硝唑(Metronidazole)、氯甲基硝唑(5-Chloro-1-methyl-4-nitroimidazole)和苯并咪唑(5-Nitrobenzimidazole)等。這些藥物在動(dòng)物體內通過(guò)C2側鏈的氧化而被快速代謝，代謝物與原藥具有相似的潛在毒性。歐盟、北美和中國等都禁止了硝基咪唑在食品動(dòng)物中的使用。因此建立動(dòng)物食品中尤其是牛奶中硝基咪唑類(lèi)藥物殘留的檢測方法具有重要意義。

　　本文使用PrepElite—GVS全自動(dòng)樣品前處理平臺使牛奶中硝基咪唑類(lèi)藥物殘留檢測繁瑣的前處理過(guò)程自動(dòng)化，大大簡(jiǎn)化了人工操作，并且有較理想的結果。

　　實(shí)驗

　　儀器與試劑

　　PrepElite-GVS: AutoClean全自動(dòng)凝膠滲析色譜凈化系統，附凝膠色譜柱Bio-Beads SX3,20×300mm;Sepline全自動(dòng)固相萃取系統;LiqVap全自動(dòng)定量濃縮系統(萊伯泰科有限公司);

　　LC-MS/MS 8030(島津);

　　C18固相萃取柱(LabTech，1000mg/6mL);

　　硝基咪唑類(lèi)藥物標準品：甲硝唑(純度≥99.5%)，苯并咪唑(純度≥98%)，氯甲基硝唑(純度≥97.5%);

　　乙酸乙酯(分析純和色譜純),環(huán)己烷(分析純)，乙腈(分析純);氯化鈉(分析純)，磷酸氫二鉀(分析純)，無(wú)水硫酸鈉(分析純)，甲醇(色譜純)，所用水均為超純水。

　　標樣和樣品處理

　　標準溶液的配置

　　標準儲備液：分別稱(chēng)取10.0mg標準品，用甲醇溶解并定容于10mL容量瓶中，該溶液濃度為1mg/mL，避光保存于-20℃。

　　混合標準中間液：分別吸取儲備液1mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容，該溶液濃度為100μg/mL。

　　混合標準工作液：用流動(dòng)相比例水∶甲醇(85∶15)稀釋混合標準中間液到合適的濃度。

　　樣品配置

　　在超市購買(mǎi)新鮮的牛奶，以待實(shí)驗用。

　　樣品提取方法

　　吸取牛奶試樣5.0mL，置于50mL離心管，加5mL乙腈，并用20mL乙酸乙酯進(jìn)行提取，超聲10min，離心，收集上清液;再加入20mL乙酸乙酯重復提取一次。合并收集液，用無(wú)水硫酸鈉脫水，過(guò)濾紙。氮吹近干濾液，乙酸乙酯∶環(huán)己烷(1∶1)定容，供GVS凈化。

　　樣品凈化方法

　　在PrepElite-GVS全自動(dòng)樣品前處理平臺軟件上編制硝基咪唑類(lèi)藥物的凈化方法。

　　GPC餾分收集液在LiqVap定量濃縮近干并用甲醇置換(濃縮至5mL)。系統自動(dòng)進(jìn)行C18固相萃?。褐罨?，上樣體積4mL，洗脫體積15mL、氮氣吹干。SPE上樣液和洗脫液在LiqVap濃縮近干，并用水∶甲醇(85∶15)置換，過(guò)濾膜，進(jìn)LC-MS/MS檢測。

　　LC-MS/MS的條件

　　液相色譜條件：色譜柱：VP-ODS 150×2mm，2μm;柱溫：35℃;流動(dòng)相：A-0.1%甲酸水溶液，B-甲醇;流速0.25mL/min，等度洗脫程序，A∶B(85∶15)。進(jìn)樣量：10μL。

　　質(zhì)譜條件：電噴霧離子源正離子模式(ESI+);監測模式：多反應監測模式(MRM)參數，見(jiàn)表1;脫溶劑管：250℃，加熱模塊：400℃;霧化氣流速2L/min，干燥氣流速5L/min。硝基咪唑類(lèi)藥物標液(200 ppb)GVS凈化后的TIC譜圖，見(jiàn)圖2。

　　結果與討論

　　牛奶樣品中硝基咪唑類(lèi)藥物加標進(jìn)GVS的回收率及RSD

　　采用加標樣品(加標濃度0.2mg/L)，經(jīng)提取、GVS凈化處理，并用LC-MS/MS分析，計算加標回收率及相對標準偏差。3種硝基咪唑類(lèi)藥物的回收率均在60%～85%之間，RSD均小于7%，見(jiàn)表2。

　　結論

　　本方法對牛奶樣品提取，并采用PrepElite-GVS(濃縮系統-GPC凝膠凈化系統-SPE分離系統)全自動(dòng)樣品前處理平臺進(jìn)行GPC和C18固相萃取柱凈化，并采用LC-MS/MS檢測其中的硝基咪唑類(lèi)藥物殘留，3種硝基咪唑類(lèi)藥物的回收率均在60%～85%之間，RSD均小于7%。實(shí)驗過(guò)程自動(dòng)化程度高，操作簡(jiǎn)單，結果顯示數據理想，可用于常規的牛奶中硝基咪唑類(lèi)藥物殘留的檢測。