□ 賽默飛世爾科技(中國)有限公司 供稿

　　自1996年轉基因作物商業(yè)化以來(lái)，轉基因技術(shù)研究范圍不斷擴大，轉基因食品也越來(lái)越多地走進(jìn)消費者的生活。2011年，全球轉基因農作物種植面積達到1.6億公頃，大量的轉基因農產(chǎn)品被直接或間接的制成人類(lèi)的食品，呈迅猛發(fā)展的趨勢。以轉基因生物為直接食品，作為原料加工生產(chǎn)的食品，以及喂養家畜得到的衍生食品，在廣義上都可以稱(chēng)為轉基因食品。我國于2002年3月20日開(kāi)始實(shí)行的《農業(yè)轉基因生物標識管理辦法》規定，國家對農業(yè)轉基因生物實(shí)行檢驗檢疫和標識制度。世界各國均對轉基因食品及其加工產(chǎn)品出具是否為轉基因產(chǎn)品的認定報告。因此轉基因食品的檢測就顯得尤為重要。

　　轉基因技術(shù)是利用分子生物學(xué)技術(shù)，將某些生物的基因轉移到農作物中去，改造生物的遺傳物質(zhì)，使其在性狀、營(yíng)養品質(zhì)、消費品質(zhì)方面向人類(lèi)所需要的目標轉變。轉基因食品的檢測主要從兩個(gè)方面入手，即核酸水平和蛋白質(zhì)水平，核酸水平主要檢測報告基因、啟動(dòng)子和終止子，是當前轉基因產(chǎn)品檢測的重要手段。核酸水平的檢測可分為定性和定量?jì)煞N。本文分別對賽默飛世爾科技(中國)有限公司(以下簡(jiǎn)稱(chēng)賽默飛)在核酸水平上進(jìn)行轉基因食品檢測的試劑和儀器進(jìn)行綜述。

　　轉基因提取試劑盒

　　轉基因提取試劑盒(貨號：4466336，見(jiàn)圖1)用來(lái)從復雜樣品中提取基因組DNA，繼而用于PCR或其它分子生物學(xué)技術(shù)。該試劑盒可處理的樣品類(lèi)型包括原材料、食品成分、加工產(chǎn)品，例如種子、谷物、面粉、大豆粉、肉類(lèi)、奶制品、果汁等。樣品勻漿后加入合適體積的裂解液1，溫浴裂解后離心去除沉淀，加入蛋白酶K和裂解液2再次裂解，加入乙醇混勻并轉移至過(guò)濾柱收集樣品，洗滌洗脫DNA.按照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)建議的樣品量和試劑量，可獲得0～10mg基因組DNA，提取產(chǎn)量與樣品加工程度有關(guān)，經(jīng)多次理化加工過(guò)的樣品提取DNA量較低(表1)。

　　QuantStudioTM7 Flex實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀

　　QuantStudioTM7 Flex實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(圖2)一如既往地提供了ViiATM7系統所具備的可靠性能、靈敏度和準確性，并采用了全新的工業(yè)設計，適用于中等至高通量實(shí)時(shí)熒光定量PCR，有助于提升實(shí)驗室的多功能性。只需一臺儀器即可在96孔、快速96孔和384孔形式或TaqMan® Array微流體芯片之間更換。利用不同的染料、形式和自動(dòng)化應用潛能，使不同應用之間的切換變得更為簡(jiǎn)單。

　　較高的應用多樣性——優(yōu)化的實(shí)驗方案和試劑及直觀(guān)的軟件可滿(mǎn)足最廣泛的應用要求。

　　快速上手——QuantStudio®7 Flex系統直觀(guān)的軟件、簡(jiǎn)單的觸摸屏設置、自動(dòng)化集成以及輕松的加熱模塊更換，可以立刻上手操作。

　　更快速地獲得更多結果——采用TaqMan®Array微流體芯片和TwisterTM機器人可輕松運行數百個(gè)實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應。QuantStudio® 7 Flex系統可在自動(dòng)化條件下使通量性能最大化。

　　模塊靈活性——熱循環(huán)模塊可輕松更換，針對不同研究項目可以選擇標準96孔，快速96孔，快速384孔和TaqMan®低密度芯片模塊。定制的TaqMan®低密度芯片(圖3)是一種預置引物探針的384孔微流體芯片，無(wú)需液體機器人或多通道移液器裝載樣品即可同時(shí)完成384個(gè)實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應。這種高度靈活的芯片可以對1～8個(gè)樣品平行檢測12～384個(gè)TaqMan®目標基因(包括產(chǎn)品對照)。TaqMan®低密度芯片快速、通量高，所需核酸量少，一次可以鑒定多種玉米、大豆等轉基因品系。

　　轉基因篩查試劑盒

　　實(shí)時(shí)熒光定量PCR是檢測食品中轉基因成分最常用的方法，是通過(guò)對PCR擴增反應中產(chǎn)物的熒光信號進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測，對起始模板進(jìn)行定量或定性分析。賽默飛的TaqMan®轉基因篩查試劑盒(貨號：4466334，圖4)可檢測食品和飼料樣品DNA中主要轉基因元件的存在，并通過(guò)對轉基因元件與內源基因進(jìn)行定量來(lái)計算轉基因成分含量。該試劑盒可檢測所有經(jīng)歐盟批準的轉基因產(chǎn)品以及國際數據庫中所描述的大部分轉基因產(chǎn)品，并于A(yíng)pplied Biosystems所有熒光定量PCR儀上進(jìn)行過(guò)優(yōu)化。該試劑盒具有靈活、快速、高準確度和高靈敏度的優(yōu)勢(表1)，可對48個(gè)樣品分別進(jìn)行4個(gè)獨立的雙重檢測反應，即3組調控區域(P35S/CaMV,P34S/FMV,TNOS/A. tumefaciens)和植物內源基因/內部陽(yáng)性對照(IPC)。

　　另外，賽默飛還有TaqMan®轉基因玉米35S檢測試劑盒(貨號：4327690)和TaqMan®轉基因大豆35S檢測試劑盒(貨號：4327691)，利用兩種不同熒光標記的探針?lè )謩e檢測35S啟動(dòng)子元件和植物內源基因，從而計算轉基因成分含量。