利用CORTECS UPLC HILIC色譜柱對土豆與小麥中百草枯與敵草快的UPLC-MS/MS測定

　　□ 沃特世公司 供稿

　　敵草快和百草枯是帶雙電荷的季胺鹽類(lèi)除草劑，敵草快和百草枯的結構式見(jiàn)圖1，它們在世界各地被廣泛用于控制農作物雜草和水生雜草。美國環(huán)境保護署(USEPA)規定敵草快在土豆和小麥中的含量上限分別為100ppb(µg/kg)和20ppb。US EPA規定百草枯在土豆和小麥中的含量上限分別為500ppb和1100ppb。敵草快和百草枯是很難保留在C18或其它反相LC色譜柱上的離子物質(zhì)。離子對試劑可用于提高反相保留時(shí)間，但如果使用質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測與定量(LC-MS)，此方法通常會(huì )產(chǎn)生顯著(zhù)的離子抑制作用。一種可替代的方法，即親水作用液相色譜(HILIC)對于敵草快和百草枯的LC-MS的測定則具有明顯的優(yōu)勢：由于無(wú)需離子對試劑，顯著(zhù)提高了離子化效率。本文證實(shí)了與其它現有HILIC法相比，采用CORTECS® HILIC色譜柱的UPLC-MS/MS方法能夠顯著(zhù)改善兩種分析物的保留時(shí)間和分離度。

　　實(shí)驗

　　液相色譜條件

　　LC系統：ACQUITY UPLC H-Class;

　　色譜柱：CORTECSHILIC色譜柱，1.6µm,2.1x100mm(部件號186007106);

　　流動(dòng)相

　　(等度)：50:50A/B;

　　流動(dòng)相A：200mM甲酸銨;

　　緩沖液：pH3.7;

　　流動(dòng)相B：乙腈;

　　進(jìn)樣體積：20µL;

　　柱溫：30℃;

　　清洗溶劑：50:50乙腈/水;

　　清除溶劑：50:50乙腈/水;

　　流速：0.5mL/min;

　　樣品瓶：聚丙烯;

　　自動(dòng)進(jìn)樣器樣品瓶(部件號186002642)。

　　質(zhì)譜條件

　　MS系統：ACQUITY TQD質(zhì)譜儀;

　　電離模式：電噴霧正離子;

　　源溫度：150℃;

　　脫溶劑氣溫度:350℃;

　　脫溶劑氣流速：800L/h;

　　錐孔氣流速：30L/h;

　　碰撞氣流速：0.2mL/min;

　　數據管理：Masslynx®4.1版。

　　樣品制備

　　樣品收集和所有樣品制備步驟均應使用聚丙烯容器。對于UPLC分析，建議使用聚丙烯自動(dòng)進(jìn)樣器樣品瓶(部件號186002642)。

　　使用最近發(fā)表的方法中描述的制備流程來(lái)處理新鮮土豆和加工全麥面粉樣品1，歐盟推薦使用這種方法進(jìn)行敵草快和百草枯殘留品的篩選。

　　土豆的分析：稱(chēng)取10g樣品，裝入50mL離心管中。向預先稱(chēng)量好的樣品中加標水性標準品，并平衡30min，制得強化樣品。接下來(lái)加入10mL的萃取液(50∶50甲醇/0.1M鹽酸水溶液)，然后用手震搖2min。隨后將樣品在80℃下加熱15min，冷卻后以4000rpm(rcf3250×g)的轉速離心4min。利用45微米PTFE注射式過(guò)濾器對上清液進(jìn)行過(guò)濾。將400µL的過(guò)濾樣品用乙腈稀釋至1.0mL，然后進(jìn)行UPLC-MS分析。

　　面粉的分析：稱(chēng)取4g樣品，裝入50mL離心管中。向預先稱(chēng)量好的樣品中加標水性標準品，并平衡30min，制得強化樣品。然后向樣品中加入10mL的試劑水，渦旋混合后平衡15min。隨后對樣品進(jìn)行與上述土豆樣品相同的萃取與處理。

　　表1總結了本次研究中使用的MRM通道和LC-MS參數。

　　結果

　　圖2顯示了全麥面粉樣品(在全部樣品制備步驟前將每種分析物都強化至10ppb)的分析中獲得的典型UPLC-MS/MS提取離子色譜圖。土豆的離子色譜圖與之類(lèi)似。

　　經(jīng)證實(shí)，CORTECS UPLC HILIC分離適合與EU所采用的快速篩選法配合使用。在UPLC-MS/MS分析前，提取樣品僅經(jīng)過(guò)了過(guò)濾與稀釋。CORTECS UPLC HILIC法采用了等度方法(50∶50乙腈/緩沖液)。因此，萃取樣品僅需使用乙腈進(jìn)行1∶1的稀釋即可實(shí)現優(yōu)異的色譜性能。土豆與小麥面粉中敵草快的定量限(LOQ)低于10ng/g。土豆中百草枯的LOQ低于10ppb，而小麥面粉中百草枯的LOQ約為10ppb。

　　結論

　　使用CORTECS HILIC色譜柱可在4min內完成敵草快和百草枯的基線(xiàn)分離，能夠以10ppb或更低的檢測限實(shí)現新鮮土豆與小麥面粉中兩種季銨鹽的測定。