隨著(zhù)蘋(píng)果生長(cháng)期的延長(cháng)以及蘋(píng)果和蘋(píng)果濃縮汁出口能力的提高，它們攝入污染產(chǎn)品的可能性也隨之增加。棒曲霉素是一種真菌霉素，在蘋(píng)果腐爛過(guò)程中產(chǎn)生.本文描述了一種采用安捷倫超高惰性色譜柱檢測棒曲霉素的方法，該方法無(wú)需樣品衍生化。該色譜分析方法可以分離5-羥甲級糠醛(HMF)，它是一種由蘋(píng)果產(chǎn)品中的糖在過(guò)度加熱時(shí)生成的產(chǎn)物。使用聚苯乙烯-二乙烯苯SPE柱執行固相萃取，然后在注入GC/MS系統檢測前用乙酸乙酯進(jìn)行液/液萃取，完成樣品制備。

　　蘋(píng)果酒和蘋(píng)果汁是全球十大消費量最高的水果飲料之一。蘋(píng)果以及蘋(píng)果產(chǎn)品的三大生產(chǎn)國分別是中國、美國和波蘭。這三個(gè)國家蘋(píng)果產(chǎn)區的氣候條件非常適合多種蘋(píng)果的生長(cháng)。市售蘋(píng)果汁經(jīng)由過(guò)濾、巴氏消毒以及真空包裝等工序加工而成，口味獨特、氣味芳香、保質(zhì)期長(cháng)。棒曲霉素來(lái)源于青霉素霉菌，包裝產(chǎn)品要求盡量避免棒曲霉素的產(chǎn)生，其含量被控制在10ng/g以?xún)?。在果汁生產(chǎn)過(guò)程中對棒曲霉素的檢測方法有很多，包括HPLC/UV方法、GC方法以及GC/MS方法，這些方法有些需要衍生，有些無(wú)需衍生。盡管這些方法都經(jīng)濟可靠，但如何分離棒曲霉素與HMF對于反相HPLC方法來(lái)說(shuō)還是一個(gè)難題。不過(guò)，可以通過(guò)LC/MS/MS方法來(lái)驗證兩者是否成功分離。在鮮蘋(píng)果汁的生產(chǎn)過(guò)程中，因為加工步驟的關(guān)系，果汁中會(huì )含有果膠，果膠能夠降低血清膽固醇從而增加果汁的健康價(jià)值。然而，這種簡(jiǎn)化的加工方法增加了縮短保質(zhì)期的風(fēng)險，棒曲霉素產(chǎn)生的可能性也將顯著(zhù)提高。

　　材料與方法

　　將Agilent 7890A GC與配備有惰性EI 350℃無(wú)涂層離子源的Agilent 5975C質(zhì)譜儀聯(lián)用。Agilent J&W DB-35ms UI色譜柱安裝在多模式進(jìn)樣口(MMI)上，采用冷-不分流模式以獲取最佳樣品傳輸。棒曲霉素以及HMF購自Sigma-Aldrich公司，濃度為100μg/mL(棒曲霉素)或純品(HMF)。

　　分析條件

　　標樣

　　將乙酸乙酯作為溶劑，配置濃度范圍10～1000ng/g的棒曲霉素和HMF混合標準溶液，用于測定線(xiàn)性和檢測限。將購買(mǎi)的蘋(píng)果汁和蘋(píng)果酒冷藏保存。在初步篩選后，使用空白提取物做稀釋溶劑來(lái)制備與樣品基質(zhì)相匹配的校準組。

　　樣品制備

　　1.稱(chēng)取10g(10mL)的蘋(píng)果汁或蘋(píng)果酒置于潔凈的容器中。

　　2.向樣品中添加10ng/g(10ppb)的標樣用以測定標樣在果汁中的回收率。

　　3.依次用4mL甲醇、4mL HPLC級的去離子水平衡SPE管。

　　4.向經(jīng)過(guò)預平衡的SPE柱加10mL樣品，讓樣品自然流出(根據樣品的澄清度，蘋(píng)果酒可能需要稍微抽一下真空)。

　　5.在常壓下用8mL 1%的碳酸氫鈉水溶液淋洗柱子。

　　6.在常壓下用8mL 1%的醋酸水溶液淋洗柱子。

　　7.用收集管替換廢液管。

　　8.在常壓下用8mL HPLC級的甲醇進(jìn)行洗脫。

　　9.用溫水浴干燥洗脫液來(lái)除去甲醇，干燥至余下大約4mL的水溶液。

　　10.用3mL乙酸乙酯對洗脫液進(jìn)行液/液萃取(3次)，合并萃取液并收集于錐形管中待干燥。

　　11.將乙酸乙酯萃取液干燥至1mL，轉移至自動(dòng)進(jìn)樣瓶中待進(jìn)樣。

　　結果與討論

　　圖1是10ng/g HMF與棒曲霉素混合物的全掃描色譜圖。峰形理想、基質(zhì)背景干擾少。

　　加標樣品的回收率大于90%，說(shuō)明Bond Elut LMS SPE可用于低濃度樣品的分離。萃取步驟將會(huì )去除果汁中所含有的10%的糖類(lèi)物質(zhì)，因為它們會(huì )在短時(shí)間內污染進(jìn)樣器，使得進(jìn)樣口的維護頻率增加。被去除的還有大量維生素C，因為它會(huì )與HMF一起洗脫出來(lái)，干擾色譜峰的積分。一些高沸點(diǎn)的溶質(zhì)，如，多酚類(lèi)物質(zhì)會(huì )被一同萃取出來(lái)。這些高沸點(diǎn)物質(zhì)會(huì )在進(jìn)樣口積聚，在最高允許溫度下烘烤一段時(shí)間可被去除。本方法可以分離苯甲醛，它是一種蘋(píng)果種子腐爛時(shí)會(huì )產(chǎn)生的一種標志性化合物。盡管拖尾比較多，MMI模式下的峰對稱(chēng)性仍可與冷柱頭進(jìn)樣模式下的峰對稱(chēng)性相媲美。

　　結論

　　在使用Bond Elut LMS萃取柱以及液/液萃取制備樣品之后，Agilent J&W DB-35ms超高惰性色譜柱可以很好地分離棒曲霉素和羥甲基糠醛。如果樣品量很大，進(jìn)一步的優(yōu)化和自動(dòng)化萃取步驟可以節省大量時(shí)間。