何 沖，王 彬，賈亦森，張利娟

(陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監督檢驗研究院，陜西西安 710048)

摘 要：建立了同時(shí)測定動(dòng)物源性食品中、飼料及尿液中17種β-受體激動(dòng)劑殘留量的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法(UPLC-MS/MS)。樣品經(jīng)粉碎后用試樣經(jīng)含2%甲酸水-乙腈-甲醇溶液勻漿提取，離心后，上清液經(jīng)凈化后，用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定，分別采用內標法和外標法定量。結果表明，17種β-受體激動(dòng)劑在一定質(zhì)量濃度范圍1.0～10.0 μg/kg(腎上腺素為50～500 μg/kg)呈現出良好的線(xiàn)性關(guān)系，相關(guān)系數2>0.99;從1.0 μg/kg、2.0 μg/kg和10.0 μg/kg(腎上腺素為50 μg/kg、100 μg/kg和500 μg/kg)3個(gè)添加濃度的檢測結果中可以看出，17種化合物的回收率為67%～110%。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC/MS-MS);β-受體激動(dòng)劑;動(dòng)物源性食品;飼料

Determination of the β-agonist Residues by Ultra Performance Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry

HE Chong, WANG Bin, JIA Yisen, ZHANG Lijuan

(Shanxi Institute of Product Quality Supervision and Inspection, Xi'an 710048,China)

Abstract:The method for the simulataneous determination of seventeen β-agonists residues in animal derived foodsfeed and urine samples was developed by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC/MS-MS).The sample was extracted in 2% formic acid/water-acetonitrile-methanol solution .The extraction was applied to a solid phase extraction cartridge for cleanup, determined by MRM, quantified by internal and external standard method.The calibration curves were goog liner between the peak arears and the concentrations of 1.0~10.0 μg/kg(The adrenaline 50~500 μg/kg) with the correlation coefficient 2>0.99.The average recoveries from spiked animal issues at three concentrations of 1.0 μg/kg2.0 μg/kg、10.0 μg/kg (The adrenaline 50 μg/kg、100 μg/kg、500 μg/kg) ranged 67%～110%.

Keywords:ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC/MS-MS); β-agonists; animal derived food; feed

β-受體激動(dòng)劑類(lèi)的使用可影響營(yíng)養物質(zhì)在動(dòng)物體內的流向，從而有效地促進(jìn)肌肉組織生長(cháng)，降低體內脂肪含量，提高動(dòng)物瘦肉率[1]。競技運動(dòng)員食用可以增加肌肉/脂肪比并提高肌肉力量，同時(shí)還對呼吸系統和神經(jīng)系統有興奮作用[2]。

目前，關(guān)于β-受體激動(dòng)劑類(lèi)的檢測有HPLC法，GC/MS法、LC/MS法以及免疫法和毛細管電泳法等。液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法(LC-MS/MS法)在20世紀80年代后迅速發(fā)展并逐漸成熟，在藥物分析、法醫學(xué)、商檢、環(huán)境科學(xué)、生命科學(xué)等領(lǐng)域都得到了廣泛的應用[3]?，F在，幾乎所有類(lèi)的β-受體激動(dòng)劑都可以用LC-MS/MS法來(lái)檢測，但大部分檢測方法的前處理十分復雜，步驟煩瑣，目標物回收率過(guò)低。同時(shí)不同基質(zhì)(如食品、飼料、尿液等)[4-6]無(wú)法同時(shí)處理，時(shí)間、試劑和耗材的消耗量過(guò)大使現有方法難以實(shí)現大批量樣品的快速檢測[7]。本文所研究的方法在滿(mǎn)足檢出限和回收率要求的前提下，簡(jiǎn)化了樣品前處理的步驟，并且該方法同時(shí)適用于食品、飼料和尿液的檢測。

1 材料與方法

1.1 儀器

超高效液質(zhì)聯(lián)用儀，Thermo Fisher TSQ&Endura;

電子天平，賽多利斯科學(xué)(北京)公司BSA224S;渦旋混勻器，Scientific Industries Vortex Genie 2T;冷凍離心機，長(cháng)沙湘儀離心機有限公司H2100R;全自動(dòng)SPE，上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司EXTRA;氮吹儀，得泰儀器科技有限公司FV64。

1.2 試劑和耗材

甲醇、乙腈、甲酸均為色譜純;所用水為超純水;Captiva EMR-Lipid凈化包(安捷倫);Captiva RC針式過(guò)濾膜(安捷倫);17種β-受體激動(dòng)劑標準物質(zhì)及9種同位素內標信息詳見(jiàn)表4。

1.3 標準曲線(xiàn)的配制

用甲醇分別將標準物質(zhì)及同位素內標配制成濃度為10 μg/mL的儲備液(-18 ℃避光保存)。再分別精確吸取適量的儲備液配制成濃度為

100 ng/mL的混合標準溶液和混合內標溶液(腎上腺素除外)。加入適量混合標準溶液和混合同位素內標溶液，用水稀釋成標準工作溶液?，F配

現用。

1.4 樣品前處理

準確稱(chēng)取2 g(精確至0.01 g)試樣置于50 mL具塞離心管中，加入混合同位素內標液，渦旋混勻。加入2 mL的2%甲酸水溶液和陶瓷均質(zhì)子高速勻漿2 min，再加入8 mL甲醇︰乙腈(6︰4)渦旋振蕩5 min，4 ℃低溫9 000 r/min離心5 min。取5 mL上清液，加入到Captiva EMR-Lipid重力自流并收集(上樣后可以適當增加壓力，保證流速在1滴/s左右，速度不要過(guò)快)，待液體流干后加入2 mL的2%甲酸水︰乙腈(2︰8)洗脫，抽干，收集所有洗脫液。40 ℃氮吹至干，準確加入1 mL水超聲復溶，過(guò)Captiva RC針式過(guò)濾膜，上機待分析。

1.5 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測

1.5.1 液相色譜條件

色譜柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18(2.1 mm×100 mm，2.7 μm)或性能相當者;流動(dòng)相：A為含0.1%甲酸水溶液，B為甲醇。流速：300 μL/min;柱溫：40 ℃;進(jìn)樣量：5 μL，梯度洗脫程序見(jiàn)表 1。

1.5.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源(ESI);檢測方式：多反應監測(MRM);噴霧電壓：3.5 kv(ESI+);離子傳輸管溫度：350 ℃;霧化器溫度：300 ℃;鞘氣壓力：30 Arb;輔助器壓力：10 Arb;掃氣壓力：0 Arb。

1.6 定性與定量

在相同試驗條件下測定試樣和濃度相近的標準工作溶液，記錄試樣和標準工作溶液中的色譜保留時(shí)間，以相對于最強離子豐度的百分比作為定性離子的相對離子豐度。若試樣中檢出與標準溶液中興奮劑保留時(shí)間一致的色譜峰，且其定性離子與濃度相當的標準溶液中相應的定性離子的相對豐度相比，偏差不超過(guò)表2規定的范圍，可以確定試樣中檢出相應的目標物。

根據試樣中目標物的含量情況，選取濃度相近的混合標準工作液進(jìn)行液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜分析?；旌蠘藴使ぷ饕汉痛郎y液中目標物的響應值均在儀器線(xiàn)性響應范圍內。以色譜峰面積按內標法和外標法分別定量。

2 結果與分析

2.1 17種β-受體激動(dòng)劑及內標總離子流圖譜

圖1為17種β-受體激動(dòng)劑以及其相對應的內標的標準溶液總離子流圖譜，從圖中可以看出目標物在該色譜條件下分離度較好、質(zhì)譜響應值完全滿(mǎn)足信噪比要求，液相和質(zhì)譜條件均能滿(mǎn)足后續實(shí)驗要求。

2.2 線(xiàn)性關(guān)系

17 種 β- 受體激動(dòng)劑標準曲線(xiàn)見(jiàn)表3。

2.3 準確度和精密度

分別在樣品中添加17種興奮劑檢出限、定量限和10倍檢出限濃度的目標物進(jìn)行樣品的回收率實(shí)驗，結果見(jiàn)表4。實(shí)驗結果表明本方法在1～10 µg/kg(腎上腺素50～500 µg/kg)添加濃度范圍內，回收率為67%～110%。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的20%。

3 結論

與目前國內通用方法相比，本研究在滿(mǎn)足國家標準對檢出限、穩定性和精密度要求的前提下極大地簡(jiǎn)化了實(shí)驗步驟，縮短了樣品前處理的時(shí)間。同時(shí)本實(shí)驗對動(dòng)物源性食品、飼料和尿液等不同基質(zhì)中17種β-受體激動(dòng)劑殘留量都進(jìn)行了檢測研究，結果表明該方法還具有廣泛的應用性。解決了現有方法中不同基質(zhì)需要采用不同前處理方法的問(wèn)題。

參考文獻

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