北京維德維康生物技術(shù)有限公司(以下簡(jiǎn)稱(chēng)“維德維康”)是一家專(zhuān)注于食品中有害化合物(農獸藥、微生物、重金屬、非法添加物等)殘留快速檢測技術(shù)、動(dòng)物疫病快速診斷技術(shù)研究及相關(guān)產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的中關(guān)村高新技術(shù)企業(yè)、國家高新技術(shù)企業(yè)、國家火炬計劃重點(diǎn)高新技術(shù)企業(yè)和北京市專(zhuān)利示范單位。維德維康作為中國農業(yè)大學(xué)、國家獸藥安全評價(jià)中心的產(chǎn)業(yè)化基地，與中國獸醫藥品監察所、國家食品安全風(fēng)險評估中心等權威機構共建合作平臺，結合自身雄厚的科研力量，形成了一系列具有自主知識產(chǎn)權的關(guān)鍵技術(shù)、重點(diǎn)產(chǎn)品和創(chuàng )新工藝，擁有食品安全檢測抗原抗體資源近千種，供應檢測試劑及設備千余種。

　　真菌毒素的危害

　　真菌毒素是由產(chǎn)毒真菌在適宜環(huán)境條件下產(chǎn)生有毒代謝的產(chǎn)物，廣泛存在于糧油食品和飼料中，是自然發(fā)生的最危險的食品污染物之一。據聯(lián)合國糧農組織估算，全球每年約有25%的農產(chǎn)品受到真菌毒素的污染，每年糧食及食品損失達到10億噸。在我國，真菌毒素的污染狀況同樣不容樂(lè )觀(guān)。根據國家糧食局不完全統計，每年真菌毒素污染造成的糧食損失累計約3100萬(wàn)噸，占糧食總產(chǎn)量的6.2%，相當于陜西、甘肅、青海、寧夏、西藏5個(gè)省(自治區)全年糧食產(chǎn)量的總和。而糧油產(chǎn)品真菌毒素污染導致的應急搶救和醫療、善后撫恤、畜禽因病死亡、病畜銷(xiāo)毀處理等間接損失更大?？梢哉f(shuō)，我國農產(chǎn)品中真菌毒素污染嚴重，已成為農業(yè)可持續發(fā)展的重要限制因素之一，嚴重威脅著(zhù)人類(lèi)與動(dòng)物的健康。

　　現已查明自然界存在的真菌毒素有200多種，按真菌毒素的重要性及危害依次排列為：黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、單端孢霉烯族毒素、玉米赤霉烯酮。真菌毒素具有兩種毒性，一是致DNA損傷，嚴重者可致癌;二是細胞毒性，有破壞質(zhì)膜和細胞酶的作用。

　　對整個(gè)食品產(chǎn)業(yè)鏈而言，真菌毒素是一種“看不見(jiàn)的威脅”，能引起急、慢性中毒，損害肝臟、腎臟、神經(jīng)組織、造血組織等，嚴重的可導致死亡。真菌毒素中的黃曲霉毒素和鐮刀菌素被聯(lián)合國糧農組織(FAO)和世界衛生組織(WHO)列為自然發(fā)生的最危險的食品污染物，具有強毒性和致癌性。黃曲霉毒素更被列為I級致癌物，是惡性腫瘤的主要誘因之一;鐮刀菌素中，以T-2毒素的毒性最強。

　　殘留限量

　　目前，世界上有100多個(gè)國家或地區已經(jīng)制定了食品和飼料中真菌毒素的限量標準與法規，近幾年歐盟等發(fā)達國家和地區逐漸提高了真菌毒素的限量標準。我國各級政府十分重視真菌毒素的防控工作，農業(yè)部、科技部相繼立項相關(guān)研究和污染調查，并分別在2005年和2011年發(fā)布和修訂了真菌毒素的限量標準，在一定程度上減少了真菌毒素對人類(lèi)健康的危害。幾種常見(jiàn)霉菌毒素的殘留限量如表1。

　　主要檢測方法

　　食品中真菌毒素含量的檢測方法一直是制約真菌毒素與人類(lèi)疾病研究進(jìn)展的關(guān)鍵，現有的真菌毒素典型檢測方法包括：高效液相色譜法、薄層色譜法、毛細管電泳法、液質(zhì)聯(lián)用法等。隨著(zhù)科技的進(jìn)步，也衍生出了其他各種檢測方法，如光化學(xué)衍生-高壓液相色譜法、電化學(xué)衍生-高壓液相色譜法、熒光光度法、液相色譜-三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法等。這些方法所用到的設備價(jià)格昂貴，樣品要經(jīng)過(guò)復雜的前處理，要求技術(shù)人員有較強的操作能力和分析能力;另外儀器的耗材和維護費用都很高，導致每個(gè)樣品的檢測成本一般在200元以上，且儀器方法需對樣本進(jìn)行依次檢測，而平均每個(gè)樣本的檢測時(shí)間均在兩個(gè)小時(shí)以上，甚至需要1天的時(shí)間。新方法雖然具有靈敏、精確的優(yōu)點(diǎn)，但普遍存在著(zhù)成本昂貴、操作繁瑣、人員要求高、耗費時(shí)長(cháng)等問(wèn)題，限制了其推廣和應用，不利于常規檢測，目前主要作為檢測的參考依據使用。因此，建立準確、高效、快速檢測真菌毒素的方法是目前亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。

　　免疫化學(xué)分析方法，是利用抗原和抗體的特異性反應為基礎建立起來(lái)的特異性高、靈敏度高、成本低、對操作人員要求低的一類(lèi)快速分析方法，其對環(huán)境和儀器要求低，樣品檢測通量高、速度快，因此適合大量樣品的快速篩查和現場(chǎng)檢測。常見(jiàn)的免疫化學(xué)分析方法可以分為酶聯(lián)免疫吸附分析(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)、免疫層析試紙條(immunochromatographic strip，ICA，也稱(chēng)Lateral-flow colloidal gold-based immunoassay，俗稱(chēng)膠體金試紙條)、免疫親和柱(Immunoaffinity chromatography，IAC)、化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescent enzyme-linked immunosorbent assay, CL-ELISA)以及時(shí)間分辨熒光免疫分析(timed-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA)等。其中最常用、最成熟、應用最廣的主要是ELISA和膠體金試紙條。ELISA 除了肉眼定性判斷和半定量判斷結果，還可通過(guò)酶標儀測定吸光值進(jìn)行定量分析;膠體金試紙條只需將試紙條插入待測液體，即可在幾分鐘內讀取結果，是最適合現場(chǎng)檢測的免疫分析方法。

　　維德維康真菌毒素檢測解決方案

　　以黃曲霉毒素M1為例介紹維德維康食品中真菌毒素解決方案：

　　黃曲霉毒素M1酶聯(lián)免疫試劑盒

　　將抗原固定到酶標板上，并保持其免疫活性?？贵w與酶連接成酶標抗體，這種酶標抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。測定時(shí)，把受檢標本和酶標抗體按不同的步驟與酶標板表面的抗原反應。用洗滌的方法使酶標板上形成的抗原-抗體復合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，最后結合在酶標板上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，根據顏色反應的深淺來(lái)判斷樣品中黃曲霉毒素M1的含量。含量少，顯色深;含量多，則顯色淺。

　　設備：酶標儀(檢測波長(cháng)450nm，參考波長(cháng)630nm);漩渦振蕩器;微量移液器;計時(shí)器;離心機(4000g)。

　　檢測步驟：

　　a.將樣品用去離子水稀釋;

　　b.將標準品工作液加入對應的標準品板孔中;

　　c.在樣品孔中依次加入樣品和酶標記物工作液;

　　d.蓋好蓋板膜，輕輕振蕩，室溫下避光反應;

　　e.倒掉板孔中液體，在每孔加入洗滌工作液，充分洗滌4次;

　　f.倒掉板孔中液體，將酶標板倒置于