北京萊伯泰科儀器股份有限公司/康銳
 
前言：
黃曲霉毒素對人和動(dòng)物健康具有極大的危害，其中以黃曲霉毒素B1毒性最大，屬特劇毒的毒物范圍。引起人的中毒主要是損害肝臟，發(fā)生肝炎肝硬化，肝壞死等，急性中毒嚴重者會(huì )出現水腫昏迷，以至抽搐而死。黃曲霉毒素是目前發(fā)現的最強的致癌物質(zhì)，主要誘使動(dòng)物發(fā)生肝癌，也能誘發(fā)胃癌、腎癌、直腸癌及乳腺、卵巢、小腸等部位的癌癥。
本文建立了SepLine-S4全自動(dòng)固相萃取儀測定食用油中的黃曲霉毒素B1的方法。系統的密閉性及溶劑回收功能，可保護操作人員免受有毒有害物質(zhì)的危害。同時(shí)降低了實(shí)驗室工作量，提高了工作效率，保證結果的平行性和準確性，具有較高的回收率。

 

1. 實(shí)驗部分：

1.1儀器與試劑
SepLine-S4 全自動(dòng)固相萃取儀（萊伯泰科有限公司，美國）；
ACQUITY UPLC 超高效液相色譜儀，配備熒光(FLR)檢測器 （沃特世，美國）；
黃曲霉毒素B1標準溶液，濃度2.0μg/ml，溶于苯-乙腈（98:2）溶液；
甲醇（色譜純），超純水；
Aflatoxin B1 Columns (1ml) 免疫親和柱（Beacon，美國）。
1.2標準物質(zhì)的處理
1.2.1標準儲備液：移取1.5ml黃曲霉毒素B1標準溶液，用甲醇定容在10ml容量瓶中，配置成300ng/ml的標準儲備液，于4℃冰箱中避光保存。
1.2.2標準使用液：移取標準儲備液0.2ml，用甲醇-水（1:1）溶液定容在10mL容量瓶中，配置成6ng/ml的標準使用液，現配現用。
 
 
1.3 樣品的處理
1.3.1樣品的提取
選取市售的菜籽油，香油各一份。另有已知含黃曲霉毒素B1的花生油一份（含量已知）。
稱(chēng)取5g食用油于50ml離心管中，加入25ml甲醇-水（7:3）溶液，渦旋震蕩約1min，待震蕩均勻后超聲提取10min。將提取液通過(guò)濾紙過(guò)濾，吸取5ml濾液至SepLine進(jìn)樣瓶，再加入10ml的水，混合均勻等待凈化上樣。
1.3.2加標樣品的提取
同樣稱(chēng)取1.3.1中選用的菜籽油及香油5g，向離心管中加入1ml黃曲霉毒素B1的標準使用液(加標標準為1.2ng/g)，之后的提取過(guò)程與1.3.1完全一致。
1.3.3樣品的凈化
將Aflatoxin B1免疫親和柱的兩端蓋子去掉，傾倒出里面的保護液，放入SepLine萃取柱架中。注意隨用隨放，不可提前倒掉保護液使柱子干掉。
固相萃取方法編輯如下：

步驟	溶劑	體積(ml）	流速(ml/min)	干燥時(shí)間(sec)	是否收集
上樣	Sample	12.0	1.0	0.0	N
淋洗	甲醇-水（3:7）	2.0	1.0	0.0	N
淋洗	水	10.0	1.0	30.0	N
洗脫	甲醇	1.0	1.0	10.0	Y
洗脫	水	1.0	1.0	60.0	Y

經(jīng)SepLine固相萃取儀凈化后的樣品，再經(jīng)過(guò)濾膜過(guò)濾，待檢測。
1.4 UPLC檢測條件
色譜柱：C18 (250mm×4.6mm,5μm)；
柱溫：35℃；
流動(dòng)相：甲醇-水（1:1）
流速：0.5ml/min；
FLR檢測器激發(fā)波長(cháng)：360nm；發(fā)射波長(cháng)：440nm；
進(jìn)樣量：5μL。
 

2. 結果與討論

2.1 黃曲霉毒素B1標準使用液（6ng/ml）的液相色譜圖

2.2菜籽油樣品色譜圖
    2.3菜籽油加標樣品色譜圖

2.4香油樣品色譜圖

2.5香油加標樣品色譜圖

206已知黃曲霉毒素B1含量的花生油樣品色譜圖


2.7計算菜籽油和香油樣品的加標回收率及相對偏差，回收率均在86.88%～102.08%之間，RSD均在5%以下，具體見(jiàn)下表：

樣品	黃曲霉毒素B1的加標回收率（%）				標準偏差
	一	二	三	平均
菜籽油	97.91	102.08	95.21	98.40	3.52%
香油	95.00	86.88	90.21	90.70	4.50%

 
已知黃曲霉毒素B1含量的花生油檢測結果為：

樣品	黃曲霉毒素B1的濃度（ng/g）				已知含量(ng/g)	偏差
	一	二	三	平均
花生油	22.74	23.17	22.82	22.91	23.00	0.39%

 
結論：
本方法采用SepLine全自動(dòng)固相萃取儀，利用Aflatoxin B1免疫親和柱對菜籽油、香油及花生油進(jìn)行提取凈化，采用配備熒光檢測器的UPLC檢測黃曲霉毒素B1，平均回收率達到90%以上，RSD均小于5%。實(shí)驗過(guò)程自動(dòng)化程度高，平行性好，結果數據理想，且能最大限度的保護操作人員免受有毒有害物質(zhì)的危害，能夠完全滿(mǎn)足食用油中黃曲霉毒素的檢測要求。
 
參考文獻：

1. GB/T 18979-2003 食品中黃曲霉毒素的測定 免疫親和層析凈化高效液相色譜法和熒光光度法
2. GB 5009.24-2010 食品安全國家標準 食品中黃曲霉毒素M1和B1的測定
3. GB/T 5009.23-2006 食品中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的測定