ELISA基本原理與常見(jiàn)類(lèi)型

　　該檢測法的基本原理是將相關(guān)抗原或抗體提前結合到某種固相載體表面，在檢測過(guò)程中，受檢樣品與酶標抗原或抗體會(huì )按照相應的程序與結合在固相載體上的相關(guān)抗原或抗體產(chǎn)生反應，生成新的抗原或抗體復合物。當反應結束后固相載體上酶標抗原或抗體被結合量(即免疫復合物)和標本中待檢抗體或抗原的量成一定比例。隨后將反應液中的其它物質(zhì)清除后，加入相關(guān)酶反應底物，固相載體上的酶會(huì )直接將底物催化為有色產(chǎn)物。最后，通過(guò)對有色產(chǎn)物進(jìn)行定性或定量分析即可確定待檢樣品中相關(guān)物質(zhì)的含量。ELISA技術(shù)常見(jiàn)類(lèi)型：(1)雙抗體夾心法：該檢測法適合檢測擁有多個(gè)抗原決定簇的抗原，但由于農藥分子通常為半抗原，即只有一個(gè)抗原決定簇，因此，不適合農藥檢測。(2)簡(jiǎn)接ELISA法：對抗體無(wú)嚴格要求，只需改變包被抗原便能檢測相應的抗體。(3)競爭ELISA法：可檢測抗原，也可檢測抗體。待測抗原(抗體)與酶標抗原(抗體)通過(guò)與固定化抗體(抗原)間的競爭，獲得與檢測目的抗原(抗體)結合的機會(huì )。

　　ELISA法在食品農藥殘留檢測中的應用

　　目前，有機磷農藥是我國農業(yè)生產(chǎn)中最常用的農藥，常見(jiàn)類(lèi)型包括甲胺磷、敵敵畏、氧樂(lè )果、對硫磷、敵百蟲(chóng)等。大部分為高毒類(lèi)農藥，通過(guò)降低生物體內膽堿酯酶活性，引起遲發(fā)性神經(jīng)毒性，從而達到消滅害蟲(chóng)的目的。農藥殘留在人體內蓄積后可造成慢性中毒，具體表現為神經(jīng)功能紊亂、精神錯亂等。王華等研制出競爭酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，可用于檢測果蔬中含有的甲胺磷含量，最低檢測限為0.01g/ml，線(xiàn)性檢測范圍在0.01～100g/ml[2]。該試劑盒具有非常高的特異性，且回收率至少在93%以上，在4℃條件下可保存半年以上。

　　這是一種仿生殺蟲(chóng)劑，模擬天然除蟲(chóng)菊素結構達到殺蟲(chóng)的目的。這類(lèi)農藥的用量?jì)H次于有機磷農藥。若長(cháng)期食用含有擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農藥的食物容易引起慢性中毒。通過(guò)碳二亞胺法把相關(guān)半抗原與牛血清偶聯(lián)制成免疫原，形成聯(lián)苯菊酯的競爭間接酶聯(lián)免疫檢測法。在合適的條件下，此法的檢出限值可降到(0.016±0.002)mg/L，并和其它菊酯類(lèi)農藥不會(huì )發(fā)生交叉反應。此類(lèi)農藥對人體的危害與有機磷農藥比較相似。吳慧明等開(kāi)發(fā)了一種直接ELISA試劑盒，可用于檢測土壤中殘留的克百威含量，其最低檢測限位0.01mg/L，線(xiàn)性檢測分為在0.01～10mg/L之間[3]。另外，現已研制出定量定性檢測速滅威的間接競爭ELISA法，對此種農藥的檢出限在0.08～0.10g/ml之間，檢測線(xiàn)性范圍在1～10000g/L。

　　蘇丹紅是一種工業(yè)染色劑，成本低，被非法用作食品添加劑，常見(jiàn)于辣椒粉與咸鴨蛋中。這給公眾造成了極大的恐慌。目前，已研制出基于單克隆抗體的間接競爭性酶聯(lián)免疫吸附法，對蘇丹紅有非常高的靈敏度，操作簡(jiǎn)單，適合大批量檢測，成本低。鹽酸克倫特羅(即“瘦肉精”)曾被廣泛用于畜牧養殖業(yè)，以提高瘦肉率。目前，通過(guò)競爭酶聯(lián)免疫法能快速檢測出豬尿、豬肝內的“瘦肉精”殘余量，可重復使用，成本低廉。

　　關(guān)于ELISA的研究盡管只有短短的幾十年，但在農藥殘留分析方面的成果已非常顯著(zhù)。不僅形成了對多種農藥的ELISA檢測技術(shù)，并且還研制出用于不同農藥檢測的ELISA試劑盒。這些試劑盒具有操作方便、快捷、準確、靈敏等優(yōu)點(diǎn)，常用于現場(chǎng)食品檢測。與其它檢測法相比，ELISA技術(shù)擁有很多優(yōu)勢，但仍存在一些不足，比如，對試劑選擇性較高，無(wú)法同時(shí)分析多種成分，對結構相似的化合物可能出現交叉反應。