□ 付范尼 AB SCIEX臺北(臺灣)

　　安德烈·帥博 AB SCIEX 康科特,安大略(加拿大)

　　近來(lái)?yè)诫s高含氮組份偽造高蛋白含量假象的事件，促使食品制造商和監管部門(mén)使用快速而準確的分析方法提前確定產(chǎn)品安全性。早在2007年，面筋粉中的三聚氰胺和三聚氰酸就導致了腎衰竭等病癥的發(fā)生，引起大量貓狗死亡。2008年，中國檢測部門(mén)在數種牛奶和嬰兒配方奶粉中發(fā)現了三聚氰胺。這導致了成百上千的受害者及6例死亡案例，同時(shí)相關(guān)產(chǎn)品也在很多國家進(jìn)行了召回。

　　為了應對三聚氰胺的污染，大量針對三聚氰胺及其同系物的檢測方法被開(kāi)發(fā)出來(lái)，其中包括美國食品藥品監督管理局(FDA)開(kāi)發(fā)的針對三聚氰酸的一些方法。

　　無(wú)論如何，凱氏定氮法，這種通過(guò)測定食品中氮元素含量，間接衡量蛋白質(zhì)含量的傳統方法，依然是最為常用的。只要食品中蛋白質(zhì)的含量仍然不是直接進(jìn)行測量的，唯利是圖的使用含氮量高的化合物進(jìn)行摻假就依舊是一個(gè)嚴重的問(wèn)題。

　　檢測潛在摻假物(非蛋白氮源)，包括脒基脲，氰尿二氰尿酰胺、三聚氰酸、縮二脲、環(huán)丙三氨三嗪、滅蠅胺、雙氰胺、三聚氰胺、三脲、尿素的方法已經(jīng)被開(kāi)發(fā)并驗證，用以檢測奶制品和蛋白樣品。

　　我們發(fā)布一種快速、簡(jiǎn)單、靈敏的液質(zhì)質(zhì)方法，用以檢測牛奶和其他高蛋白食品中，μg/kg級的雙氰胺以及其他的高氮量化合物。

　　實(shí)驗

　　樣品處理

　　樣品提取液按照以下步驟處理：

　　1g均值樣品中加入10mL含有2%甲酸的乙腈;

　　充分混合，超聲10分鐘;離心10分鐘;

　　轉移50μL提取物至進(jìn)樣瓶，并加入950μL稀釋200倍。

　　針對嚴重污染的食品，可能會(huì )進(jìn)行進(jìn)一步的提取和稀釋。

　　液相

　　使用親水作用色譜柱(HILIC)和一般色譜條件對目標物進(jìn)行分離。液相分離使用Eksigent ekspertTM ultraLC 100系統，和Phenomenex LUNA HILIC 3μ(100×2mm)色譜柱。流動(dòng)相含0.1%的甲酸和10mM甲酸銨，流速為0.2mL/min(見(jiàn)表1)。進(jìn)樣體積10μL。

　　質(zhì)譜

　　AB SCIEX帶有Turbo VTM離子源的QTRAP® 5500質(zhì)譜。質(zhì)譜使用快速正負切換的多重反應監測(MRM)模式。選擇兩對離子，利用定性定量離子比率進(jìn)行確證(見(jiàn)表2)。使用13C315N3-三聚氰胺為內標。液質(zhì)質(zhì)數據采用MultiQuantTM2.1軟件進(jìn)行處理。

　　結果及討論

　　首先，通過(guò)雙氰胺標準及基質(zhì)添加，驗證最低檢出限(LOD)和重現性。圖1展示了牛奶中2μg/kg的雙氰胺色譜圖，定量離子流信噪比(S/N)為54，定性離子為13。圖2展示了牛奶中雙氰胺添加的回收曲線(xiàn)(經(jīng)過(guò)200倍稀釋)。建議使用更高的稀釋倍數，以減少單一內標難以校正的基質(zhì)效應。

　　兩對離子的回歸系數均可達到或超過(guò)0.997。MRM離子豐度全部都在0.392的25%的范圍之內。離子比率可以直接使用MultiQuantTM軟件的自動(dòng)計算并報告。

　　其次，本方法同樣可以擴展到其他潛在污染物，如圖3所示。雙氰胺(保留時(shí)間，RT=2.0min)，三聚氰胺(RT=4.6min)，氰尿二酰胺(RT=4.7min)，氰尿酰胺(RT=4.8min)使用正離子模式和三聚氰酸(RT=2.1min)使用負離子模式。使用QTRAP® 5500快速正負切換可以實(shí)現一針進(jìn)樣同時(shí)檢測雙氰胺和三聚氰酸。

　　圖4展示了三聚氰胺(正離子)和三聚氰酸(負離子)的標曲。所有的標曲的回歸系數R均大于0.998。

　　值得注意的是，三聚氰酸的的添加曲線(xiàn)(<10μg/kg)并未過(guò)原點(diǎn)。

　　使用已開(kāi)發(fā)的方法和正離子模式，檢測牛奶樣品的雙氰胺。使用批處理軟件，自動(dòng)定量并進(jìn)行離子比率確認。

　　總結

　　本文的數據展示了一種使用液質(zhì)質(zhì)，快速、簡(jiǎn)便和精準的檢測牛奶和其他高蛋白食品中，雙氰胺和其他高氮量化合物的方法。AB SCIEX QTRAP® 5500系統提供了一個(gè)非常靈敏和高選擇性的方法，而且僅需少量的樣品前處理，節省時(shí)間從而最大化通量。

　　雙氰胺等化合物的檢測，可以使用MultiQuantTM軟件進(jìn)行自動(dòng)計算、鑒定并報告。