應用優(yōu)勢
    ■ 快速、簡(jiǎn)單的樣品制備可實(shí)現高效的多種類(lèi)/多殘留分析
    ■ 從制備的樣品中除去潛在的磷脂干擾物
    ■ 快速、靈敏的UPLC ^® -MS/MS分析
 
沃特世解決方案
    ACQUITY UPLC ^®
    Xevo ^® TQ MS
    CORTECS ® UPLC 1.6 µm色譜柱
    Ostro™ 樣品制備板
 
簡(jiǎn)介
    Ostro樣品制備板可對生物樣品中的堿性藥物和相關(guān)化合物進(jìn)行簡(jiǎn)單、快速的LC-MS測定。Ostro樣品板為液液萃取、蛋白質(zhì)沉淀、過(guò)濾以及后續從最終萃取物中清除磷脂提供了方便。本文運用Ostro樣品板對牛奶中的獸藥多殘留進(jìn)行了篩查。使用此樣品板只需簡(jiǎn)單的幾個(gè)步驟即可有效沉淀蛋白質(zhì)并除去潛在的干擾物質(zhì)，從而完成牛奶樣品的制備。萃取的樣品通過(guò)樣品板時(shí)，蛋白質(zhì)通過(guò)過(guò)濾被去除，而磷脂干擾物則通過(guò)被保留在專(zhuān)利的吸附劑上被去除。完成簡(jiǎn)單的樣品制備步驟之后，使用UPLC-MS/MS對復溶樣品進(jìn)行分析。為了證明本方法的適用性，我們從主要的獸藥種類(lèi)中選擇了具有代表性的化合物，包括四環(huán)素、氟喹諾酮、磺胺類(lèi)、大環(huán)內酯、β-內酰胺和β-腎上腺素能藥物。
 
實(shí)驗
    LC系統：ACQUITY UPLC
    色譜柱：CORTECS UPLC^® CSH™ C18+，1.6µm，100×2.1mm
    流動(dòng)相A：0.1%甲酸水溶液
    流動(dòng)相B：0.1%甲酸，乙腈溶液
    進(jìn)樣體積：7μL
    進(jìn)樣模式：部分定量環(huán)進(jìn)樣
    柱溫：30℃
    弱洗針液：乙腈/水 （10:90） （600 μL）
    強洗針液：水/乙腈/IPA （50:30:40）（200 μL）
    密封清洗液：乙腈/水 （10:90）
    梯度：時(shí)間     流速
     （min） （mL/min）  %A  %B  曲線(xiàn)
       初始      0.4     85  15  初始
       2.5       0.4     60  406  6
       3.9       0.4      5  95   6
       4.9       0.4      5  95   6
       5.0       0.4     85  15   6
       7.0       0.4     85  15   6
 
MS條件
    質(zhì)譜儀：Xevo TQ MS
    離子源溫度：150℃
    脫溶劑溫度：500℃
    脫溶劑流速：1000L/h
    錐孔氣體流速：30L/h
    碰撞氣流速：0.15mL/min
   數據管理：Masslynx®4.1版
   表1匯總了本研究中使用的MRM通道和儀器參數。 樣品制備
將125 µL牛奶轉移至樣品板孔中（樣品體積不得大于125 µL） 。 加入375 µL 0.2%甲酸的乙腈 （ACN）溶液。抽吸幾次以使其充分混合。洗脫至收集板中。加入100 µL 200 mM甲酸銨的甲醇/ACN（50:50）溶液，充分混合。蒸干并復溶于100 µL ACN/25 mM甲酸銨水溶液（25:75）中。圖1展示了使用Ostro樣品板時(shí)的SPE典型設置。  
結果與討論
多殘留分析
    Ostro樣品板的結果與之前發(fā)表的方法 1相當。然而，Ostro樣品板操作耗時(shí)更少，并且更適用于高通量分析。使用此方法，一般分析人員可在幾分鐘內制備10個(gè)甚至更多的樣品，而采用之前的方法則需幾個(gè)小時(shí)。圖2顯示了恩諾沙星（10 µg/L）基質(zhì)匹配標準品的典型LC-MS色譜圖。盡管對于大部分其它化合物來(lái)說(shuō)，使用該方法分析時(shí)表現出相似的分析性能，但仍然無(wú)法對10 µg/L濃度的金霉素、土霉素和林可霉素進(jìn)行定量分析。最近研發(fā)了一種四環(huán)素的替代方法 2 。
   表2示出了觀(guān)察到的多殘留牛奶分析的回收率數據。  
磷脂去除
    牛奶中含有大量的磷脂，約占其總脂肪含量的1%  3 。在LC分離中，這些磷脂會(huì )直接干擾后洗脫的化合物。此外，結果表明磷脂殘留的累積會(huì )使反相LC分離的性能變差 4 。圖3展示了采用為鑒定磷脂而選擇的MRM通道（m/z 184>184）對牛奶樣品進(jìn)行分析的UPLC-MS/MS色譜圖。下圖展示了使用Ostro樣品板處理牛奶樣品獲得的結果。上圖為采用蛋白質(zhì)沉淀（未經(jīng)SPE純化）獲得的結果。Ostro樣品板可有效去除超過(guò)98%的磷脂。  
結論
    ■ 展示了使用Ostro樣品制備板從牛奶中快速萃取多種獸藥。
    ■ 除四環(huán)素外，該方法對其它所有種類(lèi)的被測化合物均表現出良好的篩查分析性能。
    ■ 使用Ostro直通式樣品制備板可有效去除牛奶萃取物中的幾乎全部磷脂。