摘　要：針對高效液相色譜法檢測原料乳及乳制品中三聚氰胺的方法，國家發(fā)布了GB/T 22388-2008和GB/T 22400-2008兩個(gè)推薦性標準，此兩者均規定了指定色譜柱的使用。隨著(zhù)國內外色譜柱廠(chǎng)家生產(chǎn)的檢測三聚氰胺的色譜柱不斷增加，方法也應隨之優(yōu)化，本文所使用的方法僅適用于TechMate色譜柱。
關(guān)鍵詞：高效液相色法　三聚氰胺

    高效液相色譜法（HPLC）是20世紀60年代后期發(fā)展起來(lái)的一種分析方法，被廣泛應用于保健食品功效成分、營(yíng)養強化劑、維生素類(lèi)、蛋白質(zhì)的分離測定等方面。針對近年來(lái)一些不法商家在牛奶中添加三聚氰胺的案例，筆者所在單位加強了乳制品中三聚氰胺的檢驗工作，在執行標準GB/T 22388和GB/T 22400的基礎上，摸索出另一種使用HPLC檢測原料乳和乳制品中三聚氰胺的方法，通過(guò)一段時(shí)間的實(shí)驗，效果顯著(zhù)，現將該方法總結歸納如下，供業(yè)界參考。
1 基本原理  
    用50%甲醇和乙酸鉛溶液作為原料乳和乳制品的蛋白質(zhì)沉淀劑與三聚氰胺提取劑，強陽(yáng)離子交換色譜柱分離，高效液相色譜—紫外檢測皿/二極管陣列檢測皿檢測，外標法定量。
2 試劑與材料
    水：GB/T 6682規定的一級水；乙腈（CH₃CN）：色譜純；磷酸（H₃PO₄）；磷酸二氫鉀（KH₂PO₄）；三聚氰胺溶液標準物質(zhì)：1.00mg/mL；乙酸鉛溶液：稱(chēng)取22g乙酸鉛（準確至0.01g），加水800mL完全溶解后，用水稀釋至1L，用濾膜過(guò)濾后備用；磷酸鹽緩沖液：0.05mol/L（稱(chēng)取6.8g磷酸二氫鉀，加水800mL完全溶解后，用磷酸調節pH至3.0，用水稀釋至1L，用濾膜過(guò)濾后備用）；一次性注射皿：5mL；濾膜：水相，0.45μm；針式過(guò)濾皿：有機相，0.45μm；具塞刻度試管：50mL；移液槍?zhuān)?~20μL、5~50μL、20~200μL、100~1000μL。
3 儀皿
    高效液相色譜儀：配有紫外檢測皿/二極管陣列檢驗皿；分析天平：感量0.0001g稱(chēng)0.01g；pH試紙：pH 0.5~5.0；溶劑過(guò)濾皿；離心機；渦旋混合皿；超聲波清洗皿。
4 測定步驟
    4.1 試樣的制備
    稱(chēng)取混合均勻的15g乳制品樣品（準確至0.01g），置于50mL具塞刻度試管中，加入5mL乙酸鉛溶液，在加入25mL甲醇/水（1:1），渦旋混勻，加水至50mL，渦旋振蕩6min，離心10min，轉速為3000r，靜置后用一次性注射皿吸取上清液，用針式過(guò)濾皿過(guò)濾，作為分析試樣。     4.2 高效液相色譜測定
    4.2.1 色譜條件：
色譜性：TechMate CR（1:5）-ST 5μm 120Å 4.6×250mm；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖溶液—乙腈（70+30，體積比）；流速：1mL/min；柱溫：35℃；檢測波長(cháng)：240nm；進(jìn)樣量：20μL。
    4.2.2 液相色譜分析測定
    4.2.2.1 儀皿的準備
    開(kāi)機，用流動(dòng)相平衡色譜柱，待基線(xiàn)穩定后，進(jìn)樣檢測。
    4.2.2.2 定性分析
    依據保留時(shí)間一致性進(jìn)行定性識別，根據三聚氰胺標準物質(zhì)的保留時(shí)間，確定樣品中三聚氰胺的色譜峰。
    4.2.2.3 定量分析：校準方法為外標法。
    4.2.2.3.1 標準曲線(xiàn)的繪制     用甲醇/水（1:1）將三聚氰胺溶液標準物質(zhì)逐級稀釋得1、2、5、10、20μg/mL的標準工作液，濃度由低到高進(jìn)行檢測，以峰面積—濃度作圖，得到標準曲線(xiàn)回歸方程。
    4.2.2.3.2試樣測定
    按試樣分別進(jìn)樣，獲得目標峰面積，根據標準曲線(xiàn)計算被測試樣中三聚氰胺的含量（mg/kg）。
    4.2.3 結果計算
    4.2.3.1 計算公式
 
    式中：X-乳制品三聚氰胺的含量（mg/mL）；
　　　C-從標準曲線(xiàn)得到的三聚氰胺溶液的濃度（mg/L）；
　　　V-試樣定容體積（mL）；
　　　M-樣品稱(chēng)量質(zhì)量（g）。
    4.2.3.2 計算結果有效數字
    保留3位有效數字。
    4.3 方法檢測限
    檢測限為2mg/kg。