摘　要：酒類(lèi)中總糖的測定國標指引方法多為滴定法，但該法操作步驟多、費時(shí)長(cháng)、效率低，影響因素也多，特別是含糖量較多的色酒、配料雜的酒等，其滴定終點(diǎn)難以判定，容易導致測量結果產(chǎn)生誤差。本文結合幾種酒類(lèi)中糖的成分，通過(guò)高效液相色譜法測定酒類(lèi)中的5種糖，從而計算出總糖含量。通過(guò)一系列實(shí)驗對比，結果表明用液相色譜法測定酒類(lèi)中總糖方法可靠、數據準確、方便快速。
關(guān)鍵詞：酒類(lèi)  總糖  高效液相色譜法

    糖主要包括單糖（葡萄糖、果糖等）、雙糖（蔗糖、乳糖等）和多糖（淀粉、纖維素等），不同類(lèi)型的酒含有不同的糖，葡萄酒、果酒主要含果糖、葡萄糖；黃酒主要含葡萄糖；而大部分的配制酒添加了白砂糖，即主要含蔗糖，所以酒的總糖主要為果糖、葡萄糖、蔗糖三者的加和。糖在酒中發(fā)揮著(zhù)重要作用，如改善口感，但糖會(huì )帶來(lái)一定的健康問(wèn)題，如肥胖、糖尿病、高血壓等?？偺鞘鞘称返闹匾煞种?，總糖含量也是食品行業(yè)中評價(jià)產(chǎn)品質(zhì)量、營(yíng)養、風(fēng)味的指標之一^[1]，因此為了保證和控制酒的質(zhì)量，建立簡(jiǎn)單、可靠且快速的糖類(lèi)物質(zhì)成分分析及含量測定方法具有重要意義。
    目前，國內對酒的總糖檢測方法主要是滴定法——直接滴定法^[2]適用于果酒、葡萄酒、露酒；亞鐵氰化鉀滴定法^[3]適用于干、半干黃酒；廉愛(ài)農法^[3]適用于甜、半甜黃酒。以上方法都有一個(gè)共通點(diǎn)，就是對樣品中總糖含量、實(shí)驗過(guò)程中的加熱溫度、滴定操作、滴定速度以及實(shí)驗人員技術(shù)等要求嚴格^[4]。滴定法操作步驟多、費時(shí)長(cháng)，影響因素也多，特別是含糖量較多的色酒、配料雜的酒，此類(lèi)產(chǎn)品終點(diǎn)難判定，容易導致測量結果產(chǎn)生誤差，而通過(guò)加入活性炭對有顏色的酒吸附脫色再測定，可以使樣品變?yōu)闊o(wú)色，從而使滴定終點(diǎn)容易判定。但有結果表明，不論在何種條件下，隨著(zhù)活性炭添加量的增加,吸附色素效果增強的同時(shí)吸附的糖也隨之增加，吸附時(shí)間越長(cháng)，活性炭吸附的糖越多，致使測得結果偏低^[5]。此外，不同類(lèi)型的酒采用不同的滴定法，也會(huì )導致每天處理的樣品量少，效率低。高效液相色譜法具有普及率高、操作簡(jiǎn)便、快速、分離效果好等優(yōu)點(diǎn)，是目前檢測糖類(lèi)物質(zhì)的主要手段。本文將通過(guò)優(yōu)化液相色譜分離的條件檢測酒類(lèi)中的幾種糖，結合酒類(lèi)中糖的主要成分，建立高效液相色譜法測定酒類(lèi)中總糖的方法。
1 材料與方法
1.1 儀器與試劑
    Waters e2695高效液相色譜儀，配備Waters 2414示差檢測器；果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖標準品，來(lái)源于Dr.Ehrenstorfer GmbH；超純水（18.2MΩ），實(shí)驗室自制；乙腈（色譜純）；酒樣購自本地超市。
 
1.2 標準溶液配制^[6]
    混合標準儲備液：分別稱(chēng)取果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖標準品各0.25g（精確至0.1mg）于50mL燒杯中，用超純水溶解，轉移并定容至25mL容量瓶中，保存在4℃冰箱中。
混合標準工作液：分別取1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL混合標準儲備液于10mL容量瓶中，用超純水定容至刻度。
 
1.3 樣品前處理
    酒類(lèi)樣品基質(zhì)相對簡(jiǎn)單，不含蛋白質(zhì)、脂類(lèi)等復雜物質(zhì)，可直接過(guò)0.45μm微孔濾膜至進(jìn)樣瓶，供高效液相色譜分析。 
 
1.4 液相色譜條件
    色譜柱：Athena NH2，120A，4.6×150mm，3μm。
    流動(dòng)相：乙腈+水=75+25（V/V）。
    流速：1.0mL/min。
    進(jìn)樣量：10μL；柱溫：30℃；采集時(shí)間：15min。
    檢測器溫度：35℃。
2 結果與分析
2.1 色譜條件的優(yōu)化
    2.1.1 流動(dòng)相的選擇
    在70%~80%范圍內考察不同比例的（乙腈+水）流動(dòng)相，實(shí)驗結果發(fā)現，增加乙腈的比例時(shí)，峰形有效改善，有利于各組份的分離，但分析時(shí)間會(huì )延長(cháng)；當增加水的比例時(shí)，分析時(shí)間變短，但分離度變小，且水的比例過(guò)大時(shí)，不利于流動(dòng)相在漂移管內的汽化，使基線(xiàn)噪聲增大，從而使靈敏度降低。綜合考慮分離效果、分析時(shí)間等因素，選擇乙腈+水為75+25（V/V）的體系作為流動(dòng)相。使用優(yōu)化后的液相色譜條件分離5種糖的色譜圖，如圖1所示，5種糖分離良好，峰形對稱(chēng)。同一條件分析某一酒樣的色譜圖，如圖2所示，糖分離度良好，峰形對稱(chēng)。     注 ：按出峰時(shí)間順序依次是，4.805-果糖、5.407-葡萄糖、7.354-蔗糖、8.579-麥芽糖、9.644-乳糖。     注：按出峰時(shí)間順序依次是，4.803-果糖、5.401-葡萄糖、8.491-麥芽糖、9.467-乳糖。
2.1.2 色譜柱溫度的優(yōu)化
    實(shí)驗考察了色譜柱溫度（20~40℃）對樣品中糖的檢測的影響，如圖3所示。隨著(zhù)色譜柱溫度的升高，色譜峰保留時(shí)間提前，分析時(shí)間縮短，但是隨著(zhù)柱溫的升高，色譜峰的峰形會(huì )變得不規則；而色譜柱溫過(guò)低，保留時(shí)間相近的目標峰分離效果不佳。綜合考慮分析時(shí)間與分離度，本實(shí)驗選擇色譜柱溫度為30℃，目標峰保留時(shí)間適宜且分離度佳。 2.2 方法學(xué)考察
2.2.1 線(xiàn)性關(guān)系考察
    參照1.2節方法配制糖混合標準工作溶液，分別以各分析物的峰面積（y）和對應的質(zhì)量濃度（x，mg/mL）作標準曲線(xiàn)，得到線(xiàn)性方程和相關(guān)系數，見(jiàn)表1，各組分呈線(xiàn)性關(guān)系，相關(guān)系數均大于0.999。 2.2.2 加標回收率和精密度試驗
    為驗證方法的準確度，把某一樣品和混合標準儲備液按一定比例進(jìn)行了3個(gè)梯度的加標回收實(shí)驗（n=6），實(shí)驗結果見(jiàn)表2。5種糖的平均回收率為90.1%~102%，相對標準偏差（RSD，n=6）在0.8%~1.5%之間，方法顯示了良好的準確性和重現性。 2.3 具體樣品分析
    采用本方法檢測15個(gè)具有代表性酒樣品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的含量，從而計算出總糖含量，將本方法與現行的國家標準方法進(jìn)行比較。結果如表3所示，兩種方法的測定結果較為一致。結果表明，本方法簡(jiǎn)單、準確、快速，可用于酒類(lèi)中總糖含量的測定。 3結論
    本研究通過(guò)優(yōu)化液相色譜分離的條件，樣品經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的過(guò)濾膜處理直接上機，示差檢測器檢測，外標法定量測定酒類(lèi)的糖，從而計算出總糖含量，建立了高效液相色譜法測定酒類(lèi)的總糖。該方法操作簡(jiǎn)單、快速，定量準確，重現性好，適用于酒類(lèi)中總糖的測定。
參考文獻：
    [1] 黎濤.總糖測定中取樣量的確定[J].熱帶作物機械化,1998(02):19-21.
    [2] GB/T 15038-2006 葡萄酒、果酒通用分析方法[S].
    [3] GB/T 13662-2008 黃酒[S].
    [4] 吳東林，張建寧，于飛，閆飛.對國標GB/T 15038-2006中總糖還原糖測定方法的改進(jìn)[J].科技風(fēng)，2009(07):29.
    [5] 江龍發(fā).干紅葡萄酒中總糖快速測定技術(shù)研究[D].南昌大學(xué)，2015.
    [6] GB 5009.8-2016食品安全國家標準 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測定[S].